[發明專利]一種檢測花生過敏成分Arah1的雙抗體夾心ELISA方法無效
| 申請號： | 201210187068.6 | 申請日： | 2012-06-08 |
| 公開（公告）號： | CN102680696A | 公開（公告）日： | 2012-09-19 |
| 發明（設計）人： | 匡華;彭娟;胥傳來;王利兵;尹玉云;宋珊珊;朱建平;王文彬 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標事務所 32104 | 代理人： | 時旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122 江蘇省無錫市無錫*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 花生 過敏 成分 arah1 抗體 夾心 elisa 方法 | ||
1.一種撿測花生過敏成分Arah1的雙抗體夾心ELISA方法，其特征在于：
（1）酶標板的制備：所用的包被原是鼠抗Arah1單克隆抗體，所用包被緩沖液是0.05?M、pH9.6碳酸鈉緩沖液，所用封閉液是含0.1％明膠的上述包被緩沖液；
其中，鼠抗Arah1單克隆抗體是花生蛋白粗提取液免疫BALB/c小鼠制備；
（2）酶標二抗是辣根過氧化物酶標記與一抗配對成功的鼠抗Arah1單克隆抗體；
（3）洗滌液PBST的配方為：1000?mL蒸餾水中加入氯化鈉8?g、磷酸二氫鉀0.2g、磷酸氫二鈉2.9?g、氯化鉀0.2?g、吐溫-20??0.5mL；
（4）標準品稀釋液的配方為：在含30%體積甲醇的pH?6.5的PBS中加入質量比為5%的氯化鈉；
（5）顯色液包括A液和B液，A液配方為每100?mL水中加入0.933?g檸檬酸，3.68?g?Na2HPO4·12H2O，18?μL?30%H2O2；B液配方為60?mg四甲基聯苯胺溶于100?mL乙二醇，使用時按A︰B=1︰1體積比使用；
（6）終止液為2?mol/L的硫酸；
檢測步驟為：?
1)以鼠抗Arah1單克隆抗體anti-Arah1-NO.8作為捕獲抗體包被酶標板，100μL/孔，以0.05?M、pH?9.6的碳酸鈉緩沖液為包被緩沖液，37℃孵育2h；
2)洗板：包被后，將酶標板內容溶液洗掉，拍干，每孔加220μL洗滌液，放搖床上振動3min，倒掉拍干，再加洗液反復洗板三次；
3)封閉：將板拍干后，每孔220μL封閉液，37℃孵育2h，洗板三次拍干，置37℃烘箱15min烘干備用；
4)加受檢標本，以NaCl含量為0.9%的0.01M?pH?7.4的?PBS溶液稀釋，?100μL/孔，37℃孵育0.5h，同法洗板拍干；
5)加酶標鼠抗Arah1單克隆抗體HRP-anti-Arah1-NO.5作為檢測抗體，以含0.1%明膠的PBST為抗體稀釋液，100μL/孔，37℃孵育0.5h，同法洗滌拍干；
6)顯色：每孔加入100?μL顯色液，暗處37?℃反應15?min，取出后每孔加入100?μL終止液，用酶標儀測定吸光值A450。
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