[發(fā)明專利]防治桃小食心蟲的白僵菌制劑及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210184231.3
• 申請日: 2012-06-06
• 公開（公告）號: CN102690760A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設計）人: 熊琦;高英;張艷峰;李捷;范仁俊;曹天文;謝映平;薛皎亮
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01N25/12;A01P7/04;A01G13/00;C12R1/645
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

技術領域

本發(fā)明涉及微生物制劑，具體屬于一種用于防治桃小食心蟲的球孢白僵菌制劑及其制備方法。

背景技術

桃小食心蟲（簡稱桃小）是危害嚴重的果樹食心蟲類害蟲。在北方果園普遍發(fā)生，危害蘋果、棗、梨、桃、杏、山楂等10多種果樹的果實，給果農造成很大的經濟損失。以往主要使用化學殺蟲劑對桃小進行防治。不僅會引起環(huán)境污染、殺傷天敵昆蟲、使害蟲產生抗藥性等一系列問題。而且還會造成農藥殘留，降低果實的品質。應用昆蟲病原菌開展生物防治，是實現害蟲可持續(xù)控制的重要途徑。我國從20世紀70年代以來，就開始了利用白僵菌防治桃小食心蟲的研究，取得了很大成績。

但是，第一由于桃小食心蟲是蛀果害蟲，整個幼蟲生長期都在果實內部。而現在常用的防治方法是先用監(jiān)測預報方法查知越冬幼蟲出土盛期及成蟲出現期后，再施用化學或生物殺蟲劑，一季需要噴施2~3次。需要較大的人力和物力進行監(jiān)測和實施。第二，由于白僵菌生長繁殖一般需要較高的濕度和適當的溫度。在北方成功應用白僵菌防治桃小食心蟲就要求有適應北方干旱低溫環(huán)境的本地優(yōu)良菌種，即必須獲得北方環(huán)境中自然生存的桃小食心蟲病原白僵菌的菌種，開發(fā)出適應北方地區(qū)的應用技術。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種防治桃小食心蟲的白僵菌制劑，特別是適用于北方干旱低溫地區(qū)防治桃小食心蟲的白僵菌制劑，以及制備該制劑的方法。

本發(fā)明提供的一種防治桃小食心蟲的白僵菌制劑，是采用保藏號為CGMCC?No.4526的球孢白僵菌（Beauveria?bassiana）菌種，通過固體培養(yǎng)，將培養(yǎng)物與營養(yǎng)型填料配制而成。

所述的菌種，是發(fā)明人2009年從采自山西省襄汾縣蘋果園自然罹病的桃小越冬幼蟲上分離獲得的，分類命名：球孢白僵菌(Beauveria?bassiana)，該菌種的菌株已于2011年1月5日保藏在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，菌種保藏號為CGMCC?No.4526。

本發(fā)明提供的一種防治桃小食心蟲的白僵菌制劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)一級斜面菌種培養(yǎng)：將保藏號為CGMCC?No.4526的球孢白僵菌菌種接入裝有含健康桃小食心蟲蟲尸浸出液的PDA斜面培養(yǎng)基的試管中，放入培養(yǎng)箱，在溫度為20℃-28℃、相對濕度為70％-85％條件下培養(yǎng)，待菌絲長滿斜面并產滿孢子時備用；一般培養(yǎng)時間為8-12天。

(2)二級菌種培養(yǎng)：在無菌條件下，將培養(yǎng)好的一級斜面菌種連同培養(yǎng)基一起刮下，放入含有液體培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)，接種量為每一試管菌種接種3瓶，將接種后的三角瓶放入恒溫震蕩培養(yǎng)箱，20℃-28℃、150-200r/min，培養(yǎng)至培養(yǎng)液中長滿菌絲球時備用；一般培養(yǎng)時間為10-15天。

(3)三級固體擴大培養(yǎng)：在無菌條件下，將二級菌種，按體積比為1∶10-25的接種量接入滅過菌的固體培養(yǎng)基中，在溫度為20℃-28℃、相對濕度為70％-85％條件下培養(yǎng)，至培養(yǎng)基上長滿白色菌絲，即得三級培養(yǎng)物；一般培養(yǎng)時間為25-30天。

(4)菌粉制劑制備：將原料按重量百分比計麥麩60-80，谷殼20-40（優(yōu)選：麥麩70，谷殼30）混勻，并按原料總重量加水60％-80％攪拌均勻，滅菌，冷卻至室溫后，即得填料；將填料與三級培養(yǎng)物按1-3∶1比例在無菌室內攪拌均勻，分裝，即得白僵菌菌粉制劑；

其中，所述的含健康桃小食心蟲蟲尸浸出液的PDA斜面培養(yǎng)基配比為：馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L，桃小食心蟲幼蟲干蟲尸10g/L。

所述的液體培養(yǎng)基為SDAY培養(yǎng)基，其成份及配比為：蛋白胨10g/L，酵母膏2g/L，葡萄糖40g/L；

所述的固體培養(yǎng)基通過如下方法制得：按重量百分比計，將原料麥麩68-72，谷殼26-30，奶粉1-4（優(yōu)選：麥麩70，谷殼28，奶粉2）混勻，并加入原料總重量60％-80％的水，攪拌均勻，滅菌制得。

本發(fā)明白僵菌菌粉制劑，可用于防治桃小食心蟲，特別是適用于北方干旱低溫地區(qū)防治桃小食心蟲，也可用于氣候溫暖濕潤地區(qū)防治桃小食心蟲使用。防治效果可達82.1%-90.5%。當年果園蛀果率降低83.8%-93.6%。