[發明專利]四氫異喹啉-3-羧酸修飾的LARGD七肽、其合成、抗血栓活性和應用

有效

• 申請號: 201210181079.3
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN103450344A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 趙明;彭師奇;吳建輝;王玉記;楊國棟
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/02;A61K38/08;A61P7/02
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技術領域

本發明涉及3種新型抗血栓擬肽，涉及它們的分子模擬方法，涉及它們的制備方法，涉及它們對糖蛋白IIb/IIIa和P-選擇素表達的抑制作用，涉及它們的抗血小板聚集作用，進一步涉及它們在大鼠血栓形成模型上的抗血栓作用。因而本發明涉及3種新型抗血栓擬肽作為抗血栓劑的臨床應用前景。本發明屬于生物醫藥領域。?

背景技術

在全球范圍內，血栓性疾病的發病率和死亡率都居首位。血栓患者體內的血栓有兩種，一種是由血小板通過纖維蛋白原與白血球交聯構成的血栓，另一種是由血小板通過纖維蛋白原與血小板交聯構成的血栓。?

P-選擇素以溶解型P-選擇素和不溶型P-選擇素兩種形態存在。在血小板活化狀態下，不溶型P-選擇素從血小板內膜層快速移動到活化的血小板的表面表達并被切割為溶解型P-選擇素進入血液循環。溶解型P-選擇素介導形成大量穩定的由血小板通過纖維蛋白原與白血球交聯構成的血栓。抑制不溶型P-選擇素表達并被切割為溶解型P-選擇素是設計抗血栓藥物的重要靶點。?

血小板被激活時糖蛋白IIb/IIIa外化，與纖維蛋白原結合，使血小板通過纖維蛋白原與血小板交聯構成血栓。研究糖蛋白IIb/IIIa與纖維蛋白原α鏈及纖維蛋白原γ鏈的結合方式，確定了RGDS，RGDV和RGDF是血小板聚集過程中導致纖維蛋白原被糖蛋白IIb/IIIa識別并與纖維蛋白原結合的關鍵序列。采用RGDF或RGDS或RGDV的相關序列占據血小板活化狀態下糖蛋白IIb/IIIa上纖維蛋白原的結合位點是發明抗血栓藥物的重要手段。?

因為現有的抗血栓藥物設計或單純性針對P-選擇素或單純性針對糖蛋白IIb/IIIa，還因為單一地抑制溶解型P-選擇素介導的由血小板通過纖維蛋白原與白血球交聯構成的血栓或單一地抑制糖蛋白IIb/IIIa介導的血小板通過纖維蛋白原與血小板交聯構成的血栓都得不到滿意的臨床療效。?

為適應臨床要求，發明人提出發展可同時針對兩種血栓的新型抗血栓劑。在分析了P-選擇素的結構，定義了它的活性口袋和確定了可與活性口袋對接的3S-四氫異喹啉-3-羧酸?的基礎上，發明人運用分子建模技術設計了合乎要求的可抑制糖蛋白IIb/IIIa和P-選擇素表達的三種新型擬肽，N-[(3S)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Leu-Arg-Gly-Asp(Ser)-Ser，N-[(3S)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Leu-Arg-Gly-Asp(Val)-Val和N-[(3S)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Leu-Arg-Gly-Asp(Phe)-Phe。?

發明內容

本發明的第一個內容是通式I代表的三種新型擬肽，式中AA代表Ser或Val或Phe。?

本發明的第二個內容是提供通式I代表的三種新型擬肽的制備方法，該方法包括：?

1)在甲醛存在下L-Phe在濃鹽酸中合成為(3S)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸；?

2)在NaOH水溶液中用(Boc)O₂將(3S)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸轉化為(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸；?

3)在無水THF中，在二環己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基苯并三唑(HOBt)存在下將(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸與Leu-OBzl縮合為N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Leu-OBzl；?

4)在2N?NaOH水溶液中將N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Thr-OBzl皂化為N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Leu；?

5)采用液相方法從C端向N端逐步接肽制備HCl·Ala-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-OBzl；?

6)在無水THF中，在DCC和HOBt存在下N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Leu與HCl·Ala-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-OBzl縮合為N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基]-Leu-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-OBzl；?