[發(fā)明專利]基于凝膠的核酸等溫擴增試劑的保存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210178918.6
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102703427A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張慶利;黃倢;史成銀;梁艷;王勤濤;李美霞
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 張中南;曾慶國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物試劑保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生化試劑組合物的保存方法，確切地說是分子生物學(xué)中核酸等溫擴增反應(yīng)試劑及試劑混合物的常溫保存方法。

背景技術(shù)

在過去的20年里，以多聚酶鏈反應(yīng)（polymerase?chain?reaction，PCR）為代表的核酸擴增技術(shù)得到了迅猛的發(fā)展和應(yīng)用。最近幾年，產(chǎn)生了一系列新型的核酸等溫擴增技術(shù)，這些技術(shù)或基于DNA/RNA生物合成機制研究的新發(fā)現(xiàn)，或者利用具有特殊功能的核酸酶來實現(xiàn)恒溫條件下對目標(biāo)核酸的擴增；無論在實際操作還是在儀器要求方面，這些等溫擴增技術(shù)都比PCR技術(shù)更簡單和廉價，從而更容易被開發(fā)和利用；尤其是在核酸檢測及診斷領(lǐng)域，等溫擴增技術(shù)正逐漸成為PCR技術(shù)的替代方法而被廣泛應(yīng)用。利用等溫擴增技術(shù)開發(fā)的各類檢測及診斷產(chǎn)品在特異性、易用性、成本和方便性等方面具有PCR技術(shù)產(chǎn)品無可比擬的優(yōu)勢，市場前景極為廣闊。

雖然等溫擴增技術(shù)本身優(yōu)勢明顯，但基于等溫擴增技術(shù)的產(chǎn)品在大規(guī)模應(yīng)用過程中卻面臨一些問題的困擾。其中最為突出的是產(chǎn)品需要低溫冷凍保存和運輸。作為核酸擴增技術(shù)的一種，等溫擴增也需要由具有生物活性的酶的參與，而酶生物活性的長期保持需要低溫冷凍條件，同時等溫擴增反應(yīng)所需的寡聚核苷酸引物、三磷酸脫氧核苷酸（dNTP）和反應(yīng)緩沖液等均需在冷凍條件下貯存，并且反復(fù)凍融會使這些成份失效，所以基于等溫擴增技術(shù)的產(chǎn)品要求在低溫冷凍條件進行運輸和保存，這一方面增加了運輸成本，另一方面也限制了這些產(chǎn)品在不具備低溫保存條件的環(huán)境或地區(qū)的應(yīng)用。

對于大規(guī)模生產(chǎn)、商品化的基于等溫擴增技術(shù)的產(chǎn)品，為了保證產(chǎn)品的一致性、穩(wěn)定性和可靠性，也要求盡可能把各種反應(yīng)試劑一次性添加和分裝，并使產(chǎn)品在貯存和運輸過程中具備盡可能長的保質(zhì)期限。因此，發(fā)明一種能夠方便有效保存等溫擴增反應(yīng)試劑混合物的方法具有重要的價值。申請?zhí)枮?00810159414.3的發(fā)明專利“環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)試劑混合物的保存方法”公開了一種在環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)試劑混合物中添加干燥保護劑然后進行真空干燥或快速風(fēng)干實現(xiàn)環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)試劑混合物常溫長期保存的方法，但這種方法需要專門的真空冷凍干燥儀或快速風(fēng)干機等復(fù)雜的設(shè)備，還需要消耗大量的能源，并不是一種十分經(jīng)濟的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種核酸等溫擴增試劑的保存方法，能夠使核酸等溫擴增反應(yīng)試劑的混合物在常溫或室溫長期保存，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明的保存方法，是將一種或幾種核酸等溫擴增反應(yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)進行保存。

上述的凝膠，其熔點低于用于核酸等溫擴增的聚合酶的滅活溫度。

上述的凝膠，還包括有熔點高于用于核酸等溫擴增的聚合酶的滅活溫度的凝膠，這種高熔點的凝膠必須與熔點低于用于核酸等溫擴增的聚合酶的滅活溫度的凝膠同時添加，添加比例不高于熔點低于用于核酸等溫擴增的聚合酶的滅活溫度的凝膠質(zhì)量的10%。

上述的核酸等溫擴增反應(yīng)液的組分為用于核酸等溫擴增的聚合酶。

上述的核酸等溫擴增反應(yīng)液的組分還包括有引物、三磷酸脫氧核苷酸（dNTP）和/或三磷酸核苷酸（NTP）、核酸等溫擴增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液中的任一種或幾種。

上述的聚合酶為DNA聚合酶和/或RNA逆轉(zhuǎn)錄酶。

上述的聚合酶為DNA聚合酶和/或RNA聚合酶。

核酸等溫擴增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液為核酸序列依賴性擴增的反應(yīng)緩沖液、鏈替代擴增反應(yīng)緩沖液或環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)緩沖液。

本發(fā)明的保存方法，一種操作步驟如下：首先將可形成凝膠的物質(zhì)添加到核酸等溫擴增反應(yīng)液的組分中，然后在低于核酸等溫擴增聚合酶的滅活溫度下將凝膠熔解，最后冷卻凝固凝膠進行保存。

本發(fā)明的保存方法，另一種操作步驟如下：首先將可形成凝膠的物質(zhì)與水混合加熱使之溶解配成濃縮的母液，然后將濃縮的母液加入到核酸等溫擴增反應(yīng)液的組分中，最后讓溫度下降使混合物由液態(tài)凝固為固態(tài)或半固態(tài)的凝膠進行保存。

上述的可形成凝膠的物質(zhì)在核酸等溫擴增反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為0.01%~30%。

上述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)。

上述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的人工聚合物。