[發明專利]同時快速檢測食品中活的鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、傷寒沙門氏菌的方法

無效

• 申請號: 201210177199.6
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102676684A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 魏華;許恒毅;萬翠香;楊友均;徐鋒;熊勇華;賴衛華
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12R1/42
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.一種同時快速檢測食品中活的鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、傷寒沙門氏菌的方法，其特征在于包含下列步驟：

(1)取食物樣本，加緩沖液碾磨制成勻漿液，離心去除加大的食物殘渣，取上清得菌懸液，整過程均為無菌操作；

?(2)取制備好的菌懸液加疊氮溴化丙啶溶液，使疊氮溴化丙啶PMA的終質量濃度為3?μg/mL，混勻后室溫避光培養3-8min，鹵素燈曝光，光照交聯時樣品置于冰上，交聯后的懸浮液離心，所得沉淀用沸水浴法提取DNA；

（3）所得DNA進行mPCR，體系包含總共10μl反應液，其中，4?μl?制備的模板DNA溶液，2?μl?5×buffer，每條引物的量是15?pmol，1U?Taq?DNA聚合酶;反應條件是：95℃?10?min，接著40個循環（94℃?30?s，?50℃?30?s，72℃?1?min），最后?72℃?延伸10?min；

（4）mPCR?反應結束后，進行目的菌檢測分析。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟（1）所述的緩沖液為PBS磷酸鹽緩沖液。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟（2）混勻后室溫避光培養5min。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟（3）所述引物分別為：從5’-3’為

fliC-F:TGCGCTGAATGAAATCAACAAC

fliC-R:TAGAAACCGTACCATTACCGTC

Hat-F:ACTCAGGCTTCCCGTAACGC

Hat-R:GCTTCATACAGACCATCTTTAGTTG

stgA-F:TGCCAGGTTACGCCACAAACC

stgA-R:CGCTGTGGTATCAATCGTGC。

5.?如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟（4）所述目的菌檢測分析為用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增結果，若有636?bp條帶，則說明有鼠傷寒沙門氏菌，若有551?bp條帶，則說明有乙型副傷寒沙門氏菌，若有354?bp條帶，則說明有傷寒沙門氏菌菌。