[發明專利]用于檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的單克隆抗體及酶聯免疫方法與試劑盒有效

申請號：	201210176485.0	申請日：	2012-05-31
公開（公告）號：	CN102766211A	公開（公告）日：	2012-11-07
發明（設計）人：	袁宗輝;馮亮;彭大鵬;王玉蓮;陳冬梅;潘源虎;王涓;朱永利	申請（專利權）人：	華中農業大學
主分類號：	C07K16/44	分類號：	C07K16/44;G01N33/577
代理公司：	武漢開元知識產權代理有限公司 42104	代理人：	樊戎
地址：	430070 湖***	國省代碼：	湖北;42
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	用于檢測阿散酸硝苯胂酸卡巴胂單克隆抗體免疫方法試劑盒
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明屬于獸藥殘留分析和免疫學技術領域，具體涉及一種能識別阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的單克隆抗體和一種用于檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留的酶聯免疫方法（ELISA）及試劑盒。

背景技術

阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂屬于有機胂類獸藥，具有苯胂酸的基本結構，廣譜抗菌，對多種腸道致病菌有較強的抑制和殺滅作用，同時對防止豬腹瀉、雞球蟲、黑頭病有良好的效果，在畜牧生產中廣泛用作豬和雞的飼料添加劑。

有機胂類為一種毒性很低的化合物，吸收率低，代謝和排泄快，組織中殘留較少，毒副作用表現為食欲不振、體重減輕、神經麻痹、腹瀉和共濟失調，有時出現各種類型的皮炎，甚至有可能使部分家畜死亡。由于該類藥物在畜禽養殖中廣泛使用，大量的含砷的化合物進入環境中，造成土壤和水體污染，含砷化合物在環境中有較強的蓄積、遷移和轉化能力，進入食物鏈后，直接或間接對人類健康造成的危害。鑒于此我國農業部235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》對有機胂藥物在動物性食品中殘留制定了最高殘留限量。現有的阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留量的方法主要是儀器分析法，其中液相色譜法（HPLC）是可食性動物產品和飼料中有機胂殘留檢測應用最廣泛的方法。儀器分析方法雖然靈敏、準確、分離度高并且可進行多殘留檢測的定性、定量研究，但是需要昂貴的儀器、繁瑣的前處理、熟練的專業操作員。如果采用儀器分析法進行大批量樣品的檢測，其成本將非常高；而且在目前的國家檢測機構中大部分只有省市級才配備有精密的分析儀器，因此需要建立一個從篩選到確證的檢測體系。有關有機胂的殘留確證方法已經相對完善，但可用于大批量樣品初篩的檢測方法研究較少，免疫化學分析法特別是酶聯免疫吸附分析技術具有快速、靈敏度高、操作簡單、適應性強等優點，適合高通量樣品篩選，因此對于快速檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂在動物組織中的殘留，ELISA方法更具優勢。

申請號為201010100397.3的中國發明專利公開了一種檢測洛克沙胂殘留的免疫膠體金試紙條及其制備方法，該專利利用洛克沙胂重氮化后與人血清白蛋白（HSA），卵清蛋白（OVA）偶聯，制備人工抗原后通過單克隆抗體技術得到對洛克沙胂具有特異性的抗體，通過膠體金標記，制備免疫層析試紙條。該產品只能用于洛克沙胂的檢測（500μg/L消線），不能對多種有機胂藥物進行殘留監控。

發明內容

本發明的目的為：

（1）提供一種能識別阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的單克隆抗體；

（2）提供所述單克隆抗體在制備阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留檢測酶聯免疫試劑盒中的應用；

（3）提供一種含有所述單克隆抗體的酶聯免疫試劑盒；

（4）提供所述酶聯免疫試劑盒在阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留檢測中的應用；

（5）利用該單克隆抗體，建立一種能檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留的ELISA方法；

（6）提供一種所述的ELISA方法在阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留檢測中的應用。

上述目的是通過以下技術方案實現的：

一種鼠源單克隆抗體，能識別阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂，其特征在于：它是雜交瘤細胞株4F2所分泌的。

所述的雜交瘤細胞株4F2，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO:C201248。

所述的單克隆抗體，其特征在于，它是以阿散酸（ASA）與亞硝酸鈉重氮化后的偶氮化合物（DIA-ASA）與牛血清白蛋白（BSA）偶聯得到的偶聯物（DIA-ASA-BSA）作為免疫原制備得到的。