[發明專利]用于檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的單克隆抗體及酶聯免疫方法與試劑盒有效
| 申請號： | 201210176485.0 | 申請日： | 2012-05-31 |
| 公開（公告）號： | CN102766211A | 公開（公告）日： | 2012-11-07 |
| 發明（設計）人： | 袁宗輝;馮亮;彭大鵬;王玉蓮;陳冬梅;潘源虎;王涓;朱永利 | 申請（專利權）人： | 華中農業大學 |
| 主分類號： | C07K16/44 | 分類號： | C07K16/44;G01N33/577 |
| 代理公司： | 武漢開元知識產權代理有限公司 42104 | 代理人： | 樊戎 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 檢測 阿散酸 硝苯胂酸 卡巴胂 單克隆抗體 免疫 方法 試劑盒 | ||
1.一種能識別阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的單克隆抗體，其特征在于：它是由雜交瘤細胞株4F2所分泌的。
2.權利要求1所述的雜交瘤細胞株4F2，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO:C201248。
3.根據權利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，它是以阿散酸與亞硝酸鈉重氮化后的偶氮化合物與牛血清白蛋白偶聯后作為免疫原制備得到的。
4.權利要求1或3所述的單克隆抗體在制備檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留的酶聯免疫試劑盒中的應用。
5.包含權利要求1或3所述的單克隆抗體的試劑盒。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，該試劑盒是檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留的酶聯免疫試劑盒。
7.權利要求5所述的試劑盒在阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留檢測中的應用。
8.一種檢測阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留的酶聯免疫方法，其步驟如下：
（1）將阿散酸與亞硝酸鈉重氮化后的偶氮化合物與牛血清白蛋白偶聯得到免疫原；
（2）將阿散酸在戊二醛作用下與卵清蛋白偶聯得到包被原；
（3）用步驟（1）的免疫原制備得到保藏號為CCTCC?NO:C201248的雜交瘤細胞株4F2；
（4）用保藏號為CCTCC?NO:C201248的雜交瘤細胞株4F2制備單克隆抗體；
（5）用步驟（2）的包被原包被固相載體；
（6）樣品前處理：飼料樣品粉碎后用飼料提取液溫育，然后用稀釋液稀釋后檢測；肌肉樣品均質后用組織提取液提取，然后氮氣吹干，最后用稀釋液稀釋，得待測物；
（7）對步驟（6）的待測物進行檢測，
其中，
飼料提取液的組分及配比為：量取200mL甲醇，緩慢倒入800mL的樣品稀釋液中，混勻；
組織提取液的組分及配比為：稱取50mL20%三氯乙酸，加入至950mL乙腈中，混勻；
樣品稀釋液的組分及配比為：NaCl?8.0g，KH2PO4?0.2g，Na2HPO4·12H2O?2.9g，KCl?0.2g，加雙蒸水定容至1000mL。
9.權利要求8所述的酶聯免疫方法在阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂殘留檢測中的應用。
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