[發明專利]一種反義寡核苷酸

無效

• 申請號: 201210175630.3
• 申請日: 2007-05-18
• 公開（公告）號: CN102676529A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 安內米克·阿爾特斯馬-魯斯;朱迪思·克里斯蒂娜·西奧多拉·范多伊特科姆;加里-讓·布德韋恩·范奧姆門
• 申請（專利權）人: 萊頓教學醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N15/864
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 李丙林;張英

本申請是申請日為2007年5月18日的題為″用于誘導外顯子跳躍的手段和方法″的中國專利申請No.200780018157.5的分案申請。

技術領域

本發明涉及寡核苷酸及其等同物以及將它們用于誘導外顯子從mRNA中去除的應用。

背景技術

近年來，反義技術已經得到相當大的發展。反義技術的一般領域可分為若干方面。這些方面之一是外顯子跳躍領域。

在該領域中，向細胞中加入小分子從而特異地干擾信使RNA(mRNA)的剪接，并且更具體地，干擾成熟的mRNA中的特定外顯子的結合，或者更準確地說是成熟的mRNA中的特定外顯子結合不足。

在外顯子跳躍領域中，可以區分為兩種一般方法。一種方法集中在干擾剪接(即，外顯子序列的物理連接)的酶促過程。另一種方法依賴于干擾剪接過程的″邏輯學″(logistics)，即干擾通過剪接機制對外顯子的識別。兩種方法均使用小分子來獲得所需的效果。該小分子都共有核酸分子能夠″雜交″至互補序列的特性。這樣的小分子的實例當然是RNA和DNA、以及修飾的RNA和DNA(如LNA和嗎啉代化合物(morpholinos)、以及諸如PNA的核酸模擬物)。這些分子進一步被稱為通用術語″小分子″或更加經常使用的術語″反義寡核苷酸(AON)″。

小分子被認為是通過雜交至pre-mRNA(前體mRNA)的特定位點而發揮作用的。雜交被認為干擾剪接的酶促過程或者外顯子的識別。

目前，外顯子跳躍集中在將一種或多種外顯子從成熟的mRNA中特異性去除。然而，使剪接機制改變方向從而將其他的外顯子包括在mRNA中也是可能的。例如，這種方法可應用在進行選擇性剪接的基因中。在這些情形下，可將小分子設計為使剪接機制改變方向，以便更加有效地形成具體的可選擇方案(specific?alternative)。

發明內容

本發明提供一種反義寡核苷酸(AON)，包括表2中示出的序列或者由表2中示出的序列組成。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，包括14-40個核苷酸或其類似物。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，包括14-25個核苷酸或其類似物。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON包括SEQ?ID?NO：118表示的h44AON4或者由SEQ?ID?NO：118表示的h44AON4組成。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON是修飾的寡核苷酸。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON包括至少一個核苷酸類似物。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON包括選自2′-O-甲基核糖核苷酸、硫代膦酸酯骨架、嗎啉代核苷酸、鎖核酸(LNA)核苷酸、和/或乙撐橋聯核酸(ENA)核苷酸中的一種或多種修飾。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON包括一個或多個2′-O-甲基寡核糖核苷酸、硫代膦酸酯骨架、嗎啉代寡核苷酸、鎖核酸(LNA)寡核苷酸、和/或乙撐橋聯核酸(ENA)寡核苷酸。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON包括嗎啉代磷酰二胺寡核苷酸。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON包括一個或多個2′-O-甲基硫代膦酸酯核苷酸。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，所述AON包括一個或多個2′-O-甲基硫代膦酸酯寡核苷酸。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，包括全長硫代膦酸酯骨架，且其中，所有核苷酸包括2′-O-甲基修飾。

根據本發明的AON，在一種實施方式中，少于10％的核苷酸是核苷酸類似物。

本發明還提供了一種載體，表達上述AON或其前體。

根據本發明的載體，在一種實施方式中，其為病毒載體。

根據本發明的載體，在一種實施方式中，其為腺相關病毒載體。