[發(fā)明專利]一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210173705.4
• 申請(qǐng)日: 2012-05-30
• 公開（公告）號(hào): CN102707058A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張利寧;王群;劉香嵐;石永玉;郭春;朱法良;王曉燕;王嘉寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/532;G01N1/30
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

1.一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒內(nèi)容物中包括：滅活人組織切片中內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的試劑，阻斷人組織切片中交叉蛋白反應(yīng)非特異性染色的非特異性蛋白阻斷劑，與人體組織抗原結(jié)合的兔抗人的初始抗體以及抗體稀釋液，能與初始抗體連接的辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔單克隆連接抗體，能與辣根過氧化物酶反應(yīng)并顯色的顯色試劑，能特異性對(duì)組織中細(xì)胞核染色的試劑；操作時(shí)依次加入各試劑，其用量的體積配比關(guān)系為：內(nèi)源性過氧化物酶和生物素滅活劑∶非特異性蛋白阻斷劑∶初始抗體∶抗體稀釋液∶連接抗體∶顯色試劑∶細(xì)胞核染色劑=5～10∶5～10∶0.05～0.1∶5～10∶5～10∶5～20∶5～10。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，其特征在于：所述滅活人組織切片中內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的試劑為質(zhì)量濃度為3%的過氧化氫溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，其特征在于：所述阻斷人組織切片中交叉蛋白反應(yīng)非特異性染色的非特異性蛋白阻斷劑為山羊血清。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，其特征在于：所述與人體組織抗原結(jié)合的兔抗人的初始抗體是針對(duì)人體肺癌組織中特異性TIPE3抗原所制備的兔抗人特異性TIPE3抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，其特征在于：所述抗體稀釋液為含0.1%BSA的磷酸鹽緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，其特征在于：所述能與辣根過氧化物酶反應(yīng)并顯色的顯色試劑由顯色緩沖液，A：DAB底物儲(chǔ)存液，B：穩(wěn)定的過氧化物和C：增色溶液組成的，四者的體積配比關(guān)系為：顯色緩沖液∶A∶B∶C=17∶1∶1∶1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，其特征在于：所述能特異性對(duì)組織中細(xì)胞核染色的試劑為蘇木素。

8.權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒用于組織切片免疫組織化學(xué)染色診斷的使用方法，其特征在于：步驟如下：

（1）制備待檢測的石蠟組織切片；

（2）上述組織切片用蒸餾水洗凈后，加入滅活人組織切片中內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的試劑處理10分鐘，然后滴加阻斷人組織切片中交叉蛋白反應(yīng)非特異性染色的非特異性蛋白阻斷劑，反應(yīng)15分鐘，吸掉反應(yīng)液后不沖洗，加入事先用抗體稀釋液稀釋好的與人體組織抗原結(jié)合的兔抗人的初始抗體，37℃反應(yīng)1小時(shí)，然后滴加能與初始抗體連接的辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔單克隆連接抗體，反應(yīng)30分鐘，然后加入配制好的能與辣根過氧化物酶反應(yīng)并顯色的顯色試劑，反應(yīng)3～10分鐘，然后加入蘇木素染核3～10分鐘；以上加入各試劑前均用PBS洗組織切片3次，每次3分鐘，洗完后用干凈的濾紙擦凈組織切片周圍的PBS；操作過程中每一步都不能使組織干燥，務(wù)必保持組織的濕潤；蘇木素染核之后進(jìn)行脫水，透明，封片，顯微鏡觀察；所有操作均在室溫下進(jìn)行；

所述滅活人組織切片中內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的試劑為3%過氧化氫水溶液。

9.權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的一種用于診斷肺癌的Tipe3免疫組織化學(xué)檢測試劑盒用于腫瘤穿刺脫落細(xì)胞檢查的使用方法，其特征在于：步驟如下：

（1）癌組織腫瘤穿刺細(xì)胞涂片染色或載玻片上細(xì)胞培養(yǎng)：穿刺細(xì)胞均勻涂在載玻片上，待干燥后立即固定于10%中性福爾馬林溶液中10分鐘；蒸餾水洗凈后，直接進(jìn)入染色步驟；

（2）染色：向載玻片上加入滅活人組織切片中內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的試劑處理30分鐘，然后滴加阻斷人組織切片中交叉蛋白反應(yīng)非特異性染色的非特異性蛋白阻斷劑，反應(yīng)15分鐘，吸掉反應(yīng)液后不沖洗，加入事先用抗體稀釋液稀釋好的與人體組織抗原結(jié)合的兔抗人的初始抗體，37℃反應(yīng)1小時(shí)，然后滴加能與初始抗體連接的辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔單克隆連接抗體，反應(yīng)30分鐘，然后加入配制好的能與辣根過氧化物酶反應(yīng)并顯色的顯色試劑，反應(yīng)3～10分鐘，然后加入蘇木素染核3～10分鐘；以上加入各試劑前均用PBS洗組織切片3次，每次3分鐘，洗完后用干凈的濾紙擦凈組織切片周圍的PBS；操作過程中每一步都不能使組織干燥，務(wù)必保持組織的濕潤；蘇木素染核之后進(jìn)行脫水，透明，封片，顯微鏡觀察；所有操作均在室溫下進(jìn)行；

所述滅活人組織切片中內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的試劑為3%的過氧化氫溶液。