[發明專利]轉基因油菜標準樣品、其建立方法及應用

無效

• 申請號: 201210173361.7
• 申請日: 2012-05-30
• 公開（公告）號: CN102703590A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 曹際娟;徐君怡;曹冬梅;于兵
• 申請（專利權）人: 曹際娟;徐君怡;曹冬梅;于兵
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生

技術領域

本發明屬于轉基因食品檢測技術領域，具體涉及轉基因油菜RT73的標準樣品制備、其建立方法及其在檢測轉基因油菜RT73中的應用。

背景技術

近年來，轉基因作物培育技術取得突破進展，陸續推出了一批新品種，在改善農作物品質、提高產量等方面發揮了巨大作用。然而，人們對轉基因食品的安全性問題存在著很多的爭論。轉基因作物的生態風險、可能帶來的環境問題、作為食品對人體健康影響的問題、產品加貼標簽問題、運輸問題、國際貿易問題、知識產權問題等已引起世界廣泛性的關注。轉基因產品的安全性問題已由學術觀點分歧，發展到知識產權、環境問題、經濟問題甚至政治問題。歐盟和一些國家相繼出臺了轉基因產品管理法規，我國于2002年3月開始實施《農業轉基因生物安全管理條例》及其三個配套管理辦法。2001年，歐盟要求對轉基因食品進行標識管理，并提出對非轉基因食品只要不是有意污染，允許含有1%的轉基因產品（閾值），而不用標識。日本、韓國、澳大利亞等不同國家限量閾值不同，從1%-5%不等。

轉基因食品的檢測是這些旨在保護生物和生態安全、維護消費者權益、促進貿易和經濟健康發展的法規和政策的基本依據，其標準化將為制訂、實施和改進這些法規和政策提供有力保證。國內外轉基因食品的檢測研究剛剛起步，許多問題都有待解決，標準樣品則是該領域尚未解決的重要問題。開展轉基因成分檢驗標準樣品的研制在保證測試結果的可比性和溯源性、保障食品安全、解決貿易爭端，促進經濟發展等方面均具有重要的意義。更為嚴峻的問題是目前國外僅有轉基因大豆粉、轉基因玉米粉MON810等少數幾個品種的標準物質，價格非常昂貴，手續繁多，周轉時間長，不能適時地滿足檢驗檢疫工作的需要；日本正在加緊研制轉基因產品檢測的分子DNA參考標準物質，用于轉基因產品的定量檢測；2005年，我們率先在國內研制成功了轉基因大豆粉國家二級標準物質，填補了我國在轉基因成分檢測標準樣品方面的空白，但轉基因油菜籽等標準樣品仍是空白。

發明內容

鑒于國內轉基因標準樣品緊缺的狀況，本項轉基因油菜RT73標準樣品的制備完成，對全面深入的研究解決轉基因成分檢測標準樣品的制備技術和穩定性保證技術，積極開展我國轉基因產品檢測標準樣品的研制，添補該測量領域的空白，具有很重要的現實意義。

轉基因油菜籽RT73品系簡介

抗草甘膦轉基因油菜(Roundup?Ready^TM)RT73品系含有的外源基因是：1）耐除草劑基因CP4?EPSPS，受FMV35S+CTP2啟動子和E9?3’終止子調控；2）標記篩選基因GOXv247，啟動子和終止子分別為FMV35S+CTP1和E9?3’。

質粒圖譜為：

抗草甘膦轉基因油菜(Roundup?Ready^TM)RT73品系種子來自于Monsanto公司。非轉基因油菜籽種子為湘油13號品系。

本發明通過以下技術路線實現：

本發明的一方面在于：公開一種轉基因油菜RT73標準樣品，其制備方法包括：

a取油菜籽原料放在研缽中，于通風櫥內加入乙醚并用研棒攪拌、研磨，待乙醚蒸發后，將其過100目標準篩，收集粉末備用；

b向步驟a所獲得的粉末中加入等質量的水，攪拌均勻后，靜置1h，棄上清，將沉淀物制備成凍干粉；

c以轉基因油菜RT73為原料，按照步驟a和b所述方法制備凍干粉；

d以非轉基因油菜籽為原料，按照步驟a和b所述方法制備凍干粉；

e將步驟c制備的凍干粉與步驟d制備的凍干粉按2.5：100的重量比例混合后，向混合粉末中加入等質量的水，攪拌均勻后，靜置1h，棄上清，將沉淀物制備成凍干粉并分裝,0~4℃貯存；

上述步驟b~e中任一步驟所述的凍干粉，其制備方法為：

①樣品預凍：先把樣品在-80℃冷凍2h；

②冷凍過程：關好冰凍干燥機的干燥室門，開始干燥室制冷；干燥室溫度降至-35℃時，開始冷卻阱制冷；冷卻阱制冷溫度降至-40℃時，將步驟①處理的樣品迅速放入干燥室內，關好干燥室門；啟動真空泵開始抽真空；當真空度降至0.5Torr時，結束冷凍過程；

③樣品干燥：干燥室的溫度設置為15℃,當真空度降至0.1Torr時，樣品已干燥好；

④關閉真空泵，使干燥室與外界大氣相通，待內外氣壓平衡后，打開干燥室門，取出樣品，迅速旋緊瓶蓋。