[發明專利]轉基因油菜標準樣品、其建立方法及應用

無效

• 申請號: 201210173361.7
• 申請日: 2012-05-30
• 公開（公告）號: CN102703590A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 曹際娟;徐君怡;曹冬梅;于兵
• 申請（專利權）人: 曹際娟;徐君怡;曹冬梅;于兵
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生

1.轉基因油菜RT73標準樣品，其特征在于，通過下述方法制備：

a取油菜籽原料放在研缽中，于通風櫥內加入乙醚并用研棒攪拌、研磨，待乙醚蒸發后，將其過100目標準篩，收集粉末備用；

b向步驟a所獲得的粉末中加入等質量的水，攪拌均勻后，靜置1h，棄上清，將沉淀物制備成凍干粉；

c以轉基因油菜RT73為原料，按照步驟a和b所述方法制備凍干粉；

d以非轉基因油菜籽為原料，按照步驟a和b所述方法制備凍干粉；

e將步驟c制備的凍干粉與步驟d制備的凍干粉按2.5：100的重量比例混合后，向混合粉末中加入等質量的水，攪拌均勻后，靜置1h，棄上清，將沉淀物制備成凍干粉并分裝,0~4℃貯存；

上述步驟b~e中任一步驟所述的凍干粉，其制備方法為：

①樣品預凍：先把樣品在-80℃冷凍2h；

②冷凍過程：關好冰凍干燥機的干燥室門，開始干燥室制冷；干燥室溫度降至-35℃時，開始冷卻阱制冷；冷卻阱制冷溫度降至-40℃時，將步驟①處理的樣品迅速放入干燥室內，關好干燥室門；啟動真空泵開始抽真空；當真空度降至0.5Torr時，結束冷凍過程；

③樣品干燥：干燥室的溫度設置為15℃,當真空度降至0.1Torr時，樣品已干燥好；

④關閉真空泵，使干燥室與外界大氣相通，待內外氣壓平衡后，打開干燥室門，取出樣品，迅速旋緊瓶蓋。

2.一種轉基因油菜RT73的Real-Time?PCR檢測試劑盒，其特征在于，包括轉基因油菜檢測基因和陽性標準對照品：

陽性標準對照品：是權利要求1所述的轉基因油菜RT73標準樣品，最小取樣量為100mg；

轉基因油菜檢測基因，包括：

RT73基因的檢測引物和探針序列：

正向引物????????SEQ?ID?NO：1

反向引物????????SEQ?ID?NO：2

探針????????????SEQ?ID?NO：3

FatA基因的檢測引物和探針序列：

正向引物????????SEQ?ID?NO：4

反向引物????????SEQ?ID?NO：5

探針????????????SEQ?ID?NO：6。