[發明專利]檢測OTOF基因c.5833delG突變的試劑盒

無效

• 申請號: 201210171477.7
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102732613A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 王秋菊
• 申請（專利權）人: 王秋菊;中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，具體涉及用于檢測OTOF基因突變的試劑盒；本發明還涉及新的OTOF突變基因及其在診斷和/或治療感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙的應用。

背景技術

聽神經病/聽神經病譜系障礙（Auditory?Neuropathy?Spectrum?Disorders,ANSD）是由第Ⅷ顱神經的聽支受損而引起的一種特殊的感音神經性聾。表現為聲音可以通過外耳、中耳正常的進入到內耳，但聲音信號不能同步地從內耳傳輸到大腦的聽功能異常性疾病。臨床聽力檢查表現為誘發性耳聲發射正常、聽性腦干反應嚴重異常的一組聽功能障礙癥候群。聽神經病譜系障礙多自幼年或青春期起病，在高危嬰幼兒中發病率約為0.23%，在各種原因所致的ABR異常的聾病患兒中的發病率高達11%，無性別差異。目前研究表明，聽神經病譜系障礙的發病主要和遺傳、免疫、感染、中毒、代謝等相關因素相關。

按照是否合并其他系統疾病可將聽神經病譜系障礙分為兩類：一類是合并有其它顱神經和/或周圍神經病損的綜合征型疾病，如Charot?Marie?Tooth綜合征:CMT1型(脫髓鞘型)及CMT2型(軸突型)、費里德賴希共濟失調綜合征等；另一種是僅有聽力下降表現的非綜合征型聽神經病譜系障礙。非綜合征型聽神經病譜系障礙由于表型單一，基因型與表型之間有較好的對應關系，逐漸成為近年來的研究熱點。Starr等根據發病部位的不同將其分為TYPE?I型（病變部位在聽神經）和TYPE?II型（病變部位在內毛細胞及突觸）。

按照遺傳模式的不同可將聽神經病譜系障礙分為常染色體顯性遺傳（AUNA1)、常染色體隱性遺傳（NSRAN）和X連鎖隱性遺傳（AUNX1)以及線粒體DNA突變等。2003年，Varga等運用連鎖分析的方法，將四個家系定位在包含OTOF基因所在的2p23區域內，確定OTOF為第一個發現且較為常見的與非綜合征型聽神經病譜系障礙相關的基因。OTOF基因DNA序列全長101496bp，包含48個外顯子，定位于2p23。OTOF基因的編碼區，含終止密碼子如SEQ?ID?NO.1所示。OTOF長亞型變異體的mRNA長度為7172bp，所編碼的蛋白質otoferlin（如SEQ?ID?NO.2所示）包含1997個氨基酸，可能參與突觸囊泡的融合。Otoferlin具有6個鈣離子結合區域（C2domain），其中后4個含有完整的5個天冬氨酸殘基，可以與鈣離子結合，且存在1個羧基端跨膜區域（TM），這些結構在脊椎動物都是高度保守的。2006年，Petit教授研究小組觀察到小鼠otof基因編碼的蛋白質otoferlin在耳蝸內毛細胞與傳入神經元所形成的帶型突觸處呈高表達。敲除otof基因的純合小鼠表現為極重度耳聾，其內毛細胞帶型突觸形態保持正常，鈣離子流通也正常，但是突觸囊泡的胞吐作用卻完全廢止，因此得出結論：otof基因編碼的蛋白質otoferlin作為一種鈣離子感應器，在內毛細胞帶型突觸處觸發膜融合，從而在內毛細胞突觸囊泡的胞吐過程中發揮著重要作用。因此由該基因突變導致的感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙患者病變部位多在耳蝸內毛細胞或突觸，人工耳蝸手術治療效果較好。而國內外對于感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙患者OTOF基因的篩查發現，攜帶有該基因突變的聽神經病譜系障礙患者臨床多以TypeII型表現為主，適合于人工耳蝸植入手術治療并可取得良好的效果。而TYPE?I型聽神經病譜系障礙患者病變部位在聽神經，位置深在，目前尚無有效的治療方法。因此，利用對感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙患者的OTOF基因的檢測進行輔助分型，對于臨床治療具有重要的指導意義。

發明內容

本發明的一個目的在于提供用于檢測OTOF基因c.5833delG突變的試劑盒，其技術方案為：

一種用于檢測與感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙相關的位于OTOF基因的c.5833delG突變的試劑盒，所述試劑盒包括：

從待測樣品中提取DNA的試劑；

用于擴增樣本DNA的PCR反應試劑；

對PCR擴增產物進行測序的試劑；

其中，所述擴增樣本DNA的PCR反應試劑包括PCR引物，所述PCR引物擴增的目標片段包含OTOF基因第5833位堿基。

具體地，上述PCR引物為選自：

OTOF-F-1（SEQ?ID?NO.3）:5’-TGACCGGCTCCTCTCTTCCACCT-3’，