[發明專利]一種亞鐵螯合抗菌肽制備方法有效
| 申請號： | 201210171376.X | 申請日： | 2012-05-11 |
| 公開（公告）號： | CN103388014A | 公開（公告）日： | 2013-11-13 |
| 發明（設計）人： | 鄧尚貴;林慧敏;張賓 | 申請（專利權）人： | 浙江海洋學院 |
| 主分類號： | C12P21/06 | 分類號： | C12P21/06;C07K1/20;C07K1/16 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 316004 浙江省舟山市定海區氣*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 亞鐵 抗菌 制備 方法 | ||
1.一種帶魚酶解蛋白亞鐵螯合抗菌肽的制備方法，包括以下步驟：
1)將帶魚下腳料加入蒸餾水，然后加入木瓜蛋白酶進行酶解，調整酶解液的pH為5.5～6.5，酶解8～10h后滅酶，離心，去除沉淀；
2)將氯化亞鐵加入到所述酶解液中，螯合溫度為30～50℃，震蕩螯合30～60min，離心，去沉淀，成為帶魚酶解蛋白亞鐵螯合抗菌肽的粗提物。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：對所述粗提物進行一下純化步驟：
1)真空濃縮、冷凍干燥所述帶魚酶解蛋白亞鐵螯合抗菌肽的粗提物，并將所述粗提物經葡聚糖凝膠層析洗脫分離，有抗菌活性的層析組分再經反向高效液相色譜洗脫，收集洗脫液；
2)對所述洗脫液進行真空冷凍干燥，成為帶魚酶解蛋白亞鐵螯合抗菌肽。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述木瓜蛋白酶酶解溫度為30～50℃，酶解時間為8～10h；滅酶溫度為90～100℃，滅酶時間為10～20min。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述氯化亞鐵與酶解液體積份數之比為1～30∶40(mg∶mL)；螯合溫度為30～50℃，震蕩螯合30～60min。
5.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述真空濃縮帶魚酶解蛋白亞鐵螯合抗菌肽粗提物的溫度為30～50℃，濃縮時間為6～8h；冷凍干燥溫度為-60～-70℃，冷凍時間為24～36h。
6.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述葡聚糖凝膠層析柱為Sephadex?G25，所述洗脫液為pH?6.8，0.1mol/L的磷酸緩沖液，洗脫速度為18mL/h。
7.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述反向高效液相色譜為XBrigeTMPrep-C18；冷凍干燥溫度為-60～-70℃，冷凍時間為24～36h。
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