[發明專利]一種葡萄籽原花青素的制備方法

無效

• 申請號: 201210170876.1
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102690858A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 佟曉芳;陳成;姜帆
• 申請（專利權）人: 哈爾濱市海澳斯生物科技開發有限公司
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P17/16;C12R1/885;C12R1/685
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（一）技術領域

本發明涉及一種葡萄籽原花青素的制備方法,具體涉及一種采用兩株真菌發酵葡萄籽漿后提取原花青素的方法，屬生物工程領域。

（二）背景技術

近年來,?多酚類物質的生物活性及對人體的保健防病作用日益受到廣泛關注。自由基被認為是人體衰老和某些慢性疾病發生的原因之一。當人體內的自由基產生過多或清除過慢,?就會轉而攻擊各種細胞,?器官并使之受到損傷,?加速機體的衰老過程并誘發各種疾病。多酚類化合物分子結構中含有若干個酚羥基,?對自由基有較強的清除能力,?從而起到對生物組織的保護作用。原花青素是廣泛存在于植物中的一類天然多酚類化合物，具有水溶、無毒、無過敏、安全性好等特性，是一種天然的自由基清除劑和抗氧化劑，而且還有抗衰老，抗腫瘤，抗癌變，預防心腦血管疾病，預防動脈粥樣硬化等功能。葡萄籽作為原花青素的重要來源之一，在國外已得到很好的利用．我國葡萄年產量約有200萬噸，約有10%用于釀酒和加工果汁，其下角料葡萄籽約占鮮果總量的4%—5%，這些葡萄廢棄物利用率很低，大部分作為飼料、燒材或被丟棄，不僅造成環境污染，對資源也是一種浪費。因此，研究和解決葡萄籽利用問題，可以變廢為寶，防止環境污染，具有很好的社會效益和經濟效益。葡萄籽提取物原花青素是從葡萄籽中提取出的生物類黃酮,?具有抗氧化活性,?廣泛應用于食品、藥品、化妝品等領域,?其銷售額近年來一直位于美國膳食補充劑的前十名。

目前國內外關于葡萄籽花青素的提取方法主要有溶劑萃取法、微波法和超臨界CO₂萃取法等，這些方法得到的產品得率和純度較低,主要原因在于原花青素在葡萄籽中與高分子纖維素和半纖維素形成致密的結合體，難以在溶劑或者微波狀態下打開，直接導致提取效率較低。本發明采用兩株真菌復合發酵葡萄籽漿，將原花青素在葡萄籽中與高分子纖維素和半纖維素形成的致密結合體充分水解而使原花青素釋放出來，大大提高了原花青素的得率和純度。

（三）發明內容

本發明目的在于提供一種葡萄籽原花青素的制備方法。

本發明的目的是這樣實現的：本發明中所涉及的百分比除另有注明之外為質量比，本發明的產品采用這樣的方法來制備的：

1.發酵菌株的選擇及培養基的制備

發酵菌株采購于中國工業微生物菌種保藏管理中心，分別如下：

A菌——康寧木霉，Trichoderma?koningii編號為：CICC40505，培養基為：取去皮的馬鈴薯200克，切成小塊，加水1000毫升煮沸30分鐘，濾去馬鈴薯塊，將濾液補足至1000毫升，加葡萄糖20克，溶化后分裝，15磅滅菌30分鐘。

B菌——黑曲霉，Aspergillus?niger，編號為：CICC41130，培養基為：蔗糖?30克,?硝酸鈉2克,硫酸鎂0.5克,?氯化鉀?0.5克,硫酸亞鐵0.01克,?磷酸氫二鉀?1克,?蒸餾水?1000毫升，15磅滅菌30分鐘。

2.直投式發酵劑的制備過程

2.1凍干菌粉末的活化

分別量取0.9%的生理鹽水10ml于2只試管內，經121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃，將2株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30℃恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。

2.2擴大培養

2.2.1母發酵劑的制備

分別量取2株菌培養基各200ml于2只500ml三角瓶內，121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃，按培養基體積的10%接種2.1步驟中已經活化的菌種，在30℃、150轉/分鐘，搖床培養24小時，作為母發酵劑。

2.2.2生產發酵劑的制備

首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入5%的液態甘油、2%低聚木糖、2%蔗糖，

121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃，分別按5%體積比例接種母發酵劑，在30℃、150轉/分鐘，搖床培養30—36小時，檢測2株菌生產發酵劑活菌數，各生產發酵劑活菌數≥10⁹個/ml，視同為發酵成熟，如果活菌數＜10⁹個/ml，繼續培養，直至達到10⁹個/ml。

2.3粉末凍干菌種的制備

將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度0.8—1cm，加蓋瓶塞后放入-30℃冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤盛裝，放入凍干機進行冷凍干燥。

2.4直投式發酵劑的復配