[發(fā)明專(zhuān)利]一種葡萄籽原花青素的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210170876.1
• 申請(qǐng)日: 2012-05-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102690858A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 佟曉芳;陳成;姜帆
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 哈爾濱市海澳斯生物科技開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P39/00
• 分類(lèi)號(hào): C12P39/00;C12P17/16;C12R1/885;C12R1/685
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種葡萄籽原花青素的制備方法，其特征在于它是按以下步驟進(jìn)行制備：

1）發(fā)酵菌株的選擇及培養(yǎng)基的制備

發(fā)酵菌株采購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，分別如下：

A菌——康寧木霉，Trichoderma?koningii編號(hào)為：CICC40505，培養(yǎng)基為：取去皮的馬鈴薯200克，切成小塊，加水1000毫升煮沸30分鐘，濾去馬鈴薯塊，將濾液補(bǔ)足至1000毫升，加葡萄糖20克，溶化后分裝，15磅滅菌30分鐘。

B菌——黑曲霉，Aspergillus?niger，編號(hào)為：CICC41130，培養(yǎng)基為：蔗糖?30克,?硝酸鈉2克,硫酸鎂0.5克,?氯化鉀?0.5克,硫酸亞鐵0.01克,?磷酸氫二鉀?1克,?蒸餾水?1000毫升，15磅滅菌30分鐘。

2）凍干菌粉末的活化

分別量取0.9%的生理鹽水10ml于2只試管內(nèi)，經(jīng)121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃，將2株菌安瓶?jī)?nèi)的凍干菌粉末在無(wú)菌狀態(tài)下全部倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30℃恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。

3）母發(fā)酵劑的制備

分別量取2株菌培養(yǎng)基各200ml于2只500ml三角瓶?jī)?nèi)，121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃，按培養(yǎng)基體積的10%接種2）步驟中已經(jīng)活化的菌種，在30℃、150轉(zhuǎn)/分鐘，搖床培養(yǎng)24小時(shí)，作為母發(fā)酵劑。

4）生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備

首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入5%的液態(tài)甘油、2%低聚木糖、2%蔗糖，

121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃，分別按5%體積比例接種母發(fā)酵劑，在30℃、150轉(zhuǎn)/分鐘，搖床培養(yǎng)30—36小時(shí)，檢測(cè)2株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)，各生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)≥10⁹個(gè)/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)＜10⁹個(gè)/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達(dá)到10⁹個(gè)/ml。

5）粉末凍干菌種的制備

將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無(wú)菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度0.8—1cm，加蓋瓶塞后放入-30℃冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤(pán)盛裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。

6）直投式發(fā)酵劑的復(fù)配

按凍干菌粉末重量，取A菌粉末2-4份，B菌粉末3-5份，充分混勻后制成直投式發(fā)酵劑，用于發(fā)酵葡萄籽漿，直投式發(fā)酵劑的添加量為葡萄籽漿中固形物重量的0.125%。

7）原料粉漿

選擇無(wú)蟲(chóng)害、無(wú)病害、未發(fā)熱霉變、水分含量5%以下的葡萄籽，按葡萄籽重量的3倍添加去離子水，然后進(jìn)入膠體磨，循環(huán)磨漿制成葡萄籽漿。

8）配料

按葡萄籽漿重量的1%添加葡萄糖粉，充分?jǐn)嚢瑁芙馄咸烟牵瞥杉犹瞧咸炎褲{。

9）高溫滅菌

將加糖葡萄籽漿加熱至121℃滅菌20分鐘，然后冷卻至30℃。

10）接菌發(fā)酵

按加糖葡萄籽漿中固形物重量的0.125%接種6）步驟制備的直投式發(fā)酵劑，30℃、150轉(zhuǎn)/分鐘，搖床培養(yǎng)48小時(shí)。

11）離心除渣

用管式離心機(jī)15000轉(zhuǎn)/分鐘離心去除發(fā)酵葡萄籽漿中的不溶性物質(zhì)。

12）超濾提取

用截留分子量為5000?Da?的超濾膜過(guò)濾，取濾過(guò)液，再用截留分子量為150?Da?的超濾膜過(guò)濾，棄濾過(guò)液，取150?Da超濾膜截留的液體。

13）干燥

將經(jīng)過(guò)12）步驟處理后獲得的150?Da超濾膜截留的液體進(jìn)行噴霧干燥，獲得葡萄籽原花青素，即為成品。