[發(fā)明專利]一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210169838.4
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102676505A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 付言峰;任守文;方曉敏;李碧俠;王學(xué)敏;李蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

所屬技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒，尤其是能快速、安全、穩(wěn)定的提取動物各種組織樣中的DNA，所用試劑經(jīng)濟(jì)、安全，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

基因組DNA主要指單倍體細(xì)胞中包括編碼序列和非編碼序列在內(nèi)的全部DNA分子，主要存在于細(xì)胞核、線粒體、葉綠體內(nèi)。

基因組DNA的提取是許多分子生物學(xué)實驗的基礎(chǔ)，如普通PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP和Southern?bot等。

傳統(tǒng)提取基因組DNA的方法步驟繁瑣，花費時間較長，如果提取較多頭動物組織樣時，會耗費大量的人力物力。

提取基因組DNA的方法主要包括酚仿抽提法、濃鹽法、陰離子去污劑法等。總的方法和原理為：

碎化組織樣：采用眼科剪剪碎法、液氮研磨法或勻漿器研磨法將動物組織樣碎化。

消化蛋白質(zhì)：采用SDS或苯酚等蛋白變性劑水浴消化蛋白質(zhì)，分解掉盡可能多的蛋白質(zhì)。

分離析出DNA：先將DNA和RNA這兩種核酸中的RNA去除，再將DNA與蛋白質(zhì)中的蛋白質(zhì)去除，后用等體積的異丙醇或無水乙醇使DNA析出。

洗滌干燥DNA：通過70%乙醇洗滌2次DNA，并于室溫干燥。

溶解保存DNA：加入一定體積的TE緩沖液或雙蒸水（ddH₂O），4°C保存。

提取過程所用試劑較多，操作復(fù)雜且耗時較長。當(dāng)提取大批量樣品中的DNA時，工作量會很大。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

??本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種“傻瓜式”動物組織樣中的基因組DNA提取方法，操作簡單、所用試劑安全經(jīng)濟(jì)、提取效率高、DNA純度好且能快速、充分溶解，以適應(yīng)大批量樣品基因組DNA的提取。

技術(shù)方案

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：

一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒，包括：細(xì)胞裂解液（溶液A）、6?mol/L的NaCl溶液（溶液B）、三氯甲烷（溶液C）、TE緩沖液（溶液D）和蛋白酶K。

??碎化組織樣：將動物組織樣用剪刀切下20-60?mg，放在一個1.5?ml離心管蓋里，加100?μl?細(xì)胞裂解液，用眼科剪把組織樣剪碎，約剪5分鐘，然后每管再加入300?μl的裂解液（溶液A）。

消化蛋白質(zhì)：向每個裝組織樣的離心管內(nèi)加入15?μl的蛋白酶K，上下顛倒搖勻，放于65?°C的振動水浴鍋內(nèi)，水浴2個小時。

分離DNA：將水浴后的樣品每管加入200?μl的6?mol/L?的NaCl?溶液（溶液B），然后放在冰塊上，再加入500?μl的三氯甲烷（溶液C），上下?lián)u動裝有樣品的盒子10分鐘左右，將樣品4?oC?離心12000轉(zhuǎn)/分，10分鐘。

析出DNA：取離心管的上清液（約600?μl）到新的1.5ML離心管中，對號標(biāo)上記號，加入1000?μl無水乙醇（或等體積的異丙醇），小心的搖動離心管直至DNA析出，靜置2分鐘。將析出DNA的離心管4?oC離心,?12000?轉(zhuǎn)/分，5分鐘。

??洗滌DNA：倒出離心管中溶液，加入1000?μl的70%乙醇，輕彈離心管底部，使DNA浸到液體中，以便充分洗滌；4?oC離心,?12000轉(zhuǎn)/分，2分鐘。重復(fù)此步驟，洗滌第二次。

快速干燥DNA：倒出離心管中溶液，用衛(wèi)生紙吸走管口殘液，離心甩下管壁上的乙醇，用10?ul移液器吸走剩余乙醇，倒置5分鐘離心管。

溶解DNA：加入130-600?ul的TE緩沖液（溶液D）或ddH₂O，放置4?oC保存過夜，待用。

有益效果

??試劑盒含有A、B、C、D四種溶液，具有操作簡單、提取速度快、成本低廉的特點。

本發(fā)明先用蛋白酶K將細(xì)胞核蛋白中的蛋白質(zhì)除去，再用高鹽溶液對核酸進(jìn)行提純，使DNA和RNA分開，最后再用移液器快速干燥DNA，操作簡單，不但提取速度快，而且所提取的DNA質(zhì)量高。

本發(fā)明通過將DNA提取過程簡化，提取試劑組合優(yōu)化，在保證DNA質(zhì)量的前提下達(dá)到了快速、高效提取的效果：組織樣只需5分鐘剪碎、細(xì)胞裂解時間只需2個小時、DNA干燥只需5分鐘，省時省力，特別適用于提取大批量動物組織樣本DNA的試驗。