[發(fā)明專利]一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210169836.5
• 申請(qǐng)日: 2012-05-29
• 公開（公告）號(hào): CN103451162A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志才;陳鈞;任曉鋒;李佳少;黃達(dá)明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/08
• 分類號(hào): C12N9/08;C12R1/69
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行：以米曲霉為出發(fā)菌株，以含有木質(zhì)素的農(nóng)作物秸稈為原料，進(jìn)行試管擴(kuò)大培養(yǎng)、液體搖瓶培養(yǎng)、一級(jí)種子培養(yǎng)和固體發(fā)酵培養(yǎng)，得到含有錳過(guò)氧化物酶的固態(tài)發(fā)酵物，然后進(jìn)行提取得到含有錳過(guò)氧化物酶的米曲霉固體發(fā)酵物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的菌種是米曲霉任何一種菌種，如中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心（CCGMC）、中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(ACCC)、中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心?(CICC)、中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心(CMCC)、國(guó)家獸醫(yī)微生物菌種保藏中心?(CVCC)和抗生素菌種保藏管理中心等等保藏的菌種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的含有木質(zhì)素的農(nóng)作物秸稈原料是任意一種秸稈，如玉米秸稈、稻草秸稈、麥秸稈、高粱秸稈、大豆秸稈、棉花秸稈等等，秸稈首先經(jīng)過(guò)粉碎，過(guò)20～100目的篩。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的試管擴(kuò)大培養(yǎng)工藝中，其擴(kuò)大培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的液體搖瓶培養(yǎng)和一級(jí)種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基均為：葡萄糖5～30克，酒石酸銨0.1～5克，苯甲醇0.2～3克，硫酸鎂0.2～1克，吐溫80??0.5～10克，磷酸二氫鉀2～9克，鄰苯二甲酸3～18克，加水定容到1升，調(diào)pH?5～8，120～140℃滅菌20～40分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的搖瓶培養(yǎng)工藝條件為，接種一環(huán)米曲霉試管斜面孢子于裝有體積比16～48%培養(yǎng)基的三角瓶中，在轉(zhuǎn)速：150轉(zhuǎn)/分，25～35℃，培養(yǎng)24～72小時(shí)；在進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)之前，首先將米曲霉菌種接入新配置的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25～35℃，培養(yǎng)時(shí)間48～144小時(shí)；4～10℃保存?zhèn)溆谩?/p>

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的一級(jí)種子培養(yǎng)工藝為，按體積比1～20%的接種量將搖瓶培養(yǎng)種子液接種到一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在溫度25～35℃，攪拌轉(zhuǎn)速50～200轉(zhuǎn)/分，通氣量0.2～2：1體積/體積/每分鐘（通氣氣體體積/發(fā)酵液體積/每分鐘），培養(yǎng)18～72小時(shí)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)中培養(yǎng)基組成為：秸稈10千克，葡萄糖0.5～3千克，黃豆餅粉0.5～2千克；硫酸銅5～15克，硫酸亞鐵5～15克，硫酸錳5～20克，水20～60千克，該培養(yǎng)基各成分可以按此比例放大。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的發(fā)酵工藝為：按2～20%（種子液體積/發(fā)酵培養(yǎng)基重量），培養(yǎng)料厚度為0.1～0.4米，料寬0.5～2米，長(zhǎng)度不限，通氣量為0.3～1.5：1（氣體體積/發(fā)酵培養(yǎng)基重量）/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間為3天～23天，中途翻料1～2次。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種米曲霉分泌制備錳過(guò)氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的生產(chǎn)錳過(guò)氧化物酶粗品的工藝，將得到的固態(tài)發(fā)酵物粉碎，過(guò)20～100目篩，粉碎的發(fā)酵培養(yǎng)物與水按1：10～50比例混合，50～300轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，5～10℃提取4～8小時(shí)，抽濾，濾渣用10～50倍的水混合，50～300轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，5～10℃提取4～8小時(shí)，抽濾，兩次濾液合并，通過(guò)分子量5000～10000的膜截留濃縮50～100倍，-20℃冷凍干燥，得到酶制劑粗品。