[發明專利]一種鑒別Q型煙粉虱單倍型的引物及鑒別方法無效
| 申請號： | 201210169228.4 | 申請日： | 2012-05-28 |
| 公開（公告）號： | CN102676680A | 公開（公告）日： | 2012-09-19 |
| 發明（設計）人： | 褚棟;國棟;陶云荔;杜蘭英 | 申請（專利權）人： | 青島農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219 | 代理人： | 王緒銀 |
| 地址： | 266109 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒別 型煙粉虱單倍型 引物 鑒別方法 | ||
1.一種鑒別Q型煙粉虱單倍型的引物，所述引物為一對，分別為SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。
2.一種鑒別Q型煙粉虱單倍型的方法，其特征在于，步驟如下：
（1）提取Q型煙粉虱基因組DNA，得基因組DNA溶液；
（2）以步驟（1）制得的基因組DNA為模板，利用權利要求1所述的一對引物對基因組DNA中的線粒體COI基因進行PCR擴增，制得PCR擴增產物；
（3）用限制性內切酶Hin1II酶切步驟（2）制得的PCR擴增產物，得酶切產物；
（4）對步驟（3）制得的酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，當PCR產物電泳圖譜顯示被測樣品有小于100bp的一條條帶時，則該被檢測樣品為Q型煙粉虱單倍型1；當PCR產物電泳圖譜顯示被測樣品有大于100bp的一條條帶時，則為Q型煙粉虱單倍型2。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR擴增的擴增體系為：
基因組DNA溶液2.5μl，20μM引物0.5μl，5U/μl?Taq酶0.25μl，10×Taq緩沖液2.5μl，10mM?dNTP?0.5μl，ddH20補至25μl；
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR擴增的擴增條件如下：
94℃預變性5分鐘；94℃變性50秒，52℃退火40秒，72℃延伸50秒，進行35個循環；72℃延伸7分鐘。
5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中限制內切酶Hin1II酶切反應條件如下：37℃酶切1-16小時。
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