[發明專利]一種檢測苯甲酸雌二醇的酶聯免疫試劑盒

無效

• 申請號: 201210167285.9
• 申請日: 2012-05-28
• 公開（公告）號: CN102721811A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 肖付剛;呂春霞;王德國;張曉偉;王加華
• 申請（專利權）人: 許昌學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測苯甲酸雌二醇的酶聯免疫試劑盒，其中包括：96或48孔包被板(1)，苯甲酸雌二醇標準品(2)，抗苯甲酸雌二醇的單抗凍干品(3)，酶標記的羊抗鼠抗體凍干品(4)，洗滌液(5)，顯色液A(6)，顯色液B(7)和終止液(8)。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述酶標記的羊抗鼠抗體凍干品為HRP-羊抗鼠抗體凍干品，洗滌液為含有吐溫的Tris-HCl緩沖溶液，顯色液A為含有過氧化氫的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液，顯色液B為四甲基聯苯二胺的乙醇水溶液，終止液為硫酸溶液。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的包被板(1)包被固相抗原苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA；用50mmol/L?pH9.6的Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液將苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA稀釋至10mg/L做為包被液，96或48孔微孔板每孔加0.1mL包被液，4℃放置過夜，棄去包被液，沖洗三次，每孔加0.15mL含3g/L?BSA或KLH或OVA的50mmol/L?pH9.6的Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液封閉，4℃放置過夜，棄去封閉液，真空抽干，板條密封后置-20℃冷凍保存。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的苯甲酸雌二醇標準品(2)，共6瓶，濃度分別為：0ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，40ng/mL，80ng/mL，200ng/mL。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的抗苯甲酸雌二醇的單抗凍干品(3)，為抗苯甲酸雌二醇的單克隆抗體的凍干品。

6.根據權利要求5所述的抗苯甲酸雌二醇的單克隆抗體，其制備方法如下：將苯甲酸雌二醇和BSA或KLH或OVA偶聯作為抗原，免疫雌性BalB/c小鼠，檢測多抗效價達到1∶2000后，在PEG-4000作用下將免疫的小鼠脾細胞與Sp2/0小鼠骨髓瘤細胞進行融合，經過HAT選擇培養，用間接ELISA法檢測培養上清，對檢出的陽性克隆孔采用有限稀釋法進行亞克隆，雌性小鼠BalB/c腹腔注射液體石蠟、雜交瘤細胞，經培養后抽取腹水，腹水中即含有抗苯甲酸雌二醇的特異性單克隆抗體。

7.一種用權利要求1所述的試劑盒檢測苯甲酸雌二醇的方法，其特征在于：取包被有苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA的微孔包被板，加入苯甲酸雌二醇標準品或處理好的樣品到各自的微孔中，再加入苯甲酸雌二醇抗體，暗處靜置反應，洗滌液洗滌，加酶標記的羊抗鼠抗體，進行標記免疫反應，洗滌液洗滌，加顯色液A和顯色液B，暗處靜置后加終止液，在450nm處測量吸光度值，對照標準曲線計算樣品中的苯甲酸雌二醇含量。

8.根據權利要求7所述的檢測苯甲酸雌二醇的方法，其操作為：樣品前處理；取包被有苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA的微孔包被板，加入0.05mL的苯甲酸雌二醇標準品或處理好的樣品到各自的微孔中，加0.05mL抗苯甲酸雌二醇抗體，37℃暗處靜置30min，洗滌液洗三次，加0.1mL酶標記的羊抗鼠抗體，37℃暗處靜置30min，用洗滌液洗三次，加0.05mL顯色液A和0.05L顯色液B，暗處靜置15min后加終止液，在450nm處測吸光度值，從標準曲線計算樣品中的苯甲酸雌二醇含量。