[發明專利]一種清毒安腎膠囊指紋圖譜的建立方法及其應用

有效

• 申請號: 201210167274.0
• 申請日: 2012-05-25
• 公開（公告）號: CN103424498A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 宋艷剛;劉學華;黃文華;劉東來;胡淑毅;孫虹;曹暉;沈琳;江曉漫
• 申請（專利權）人: 麗珠集團利民制藥廠;國家中藥現代化工程技術研究中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;李渤

技術領域

本發明屬于藥物檢測領域，涉及一種中藥復方制劑指紋圖譜的建立方法及其應用，具體涉及一種清毒安腎膠囊指紋圖譜的建立方法及其應用。

背景技術

中藥復方制劑是指將兩味以上中藥進行配伍組合并應用于疾病治療的制劑。因其成分復雜，所以準確檢測其各有效成分的難度很大。

中藥指紋圖譜系指中藥，包括中藥材、飲片、提取物或中成藥經適當處理后，采取一定的分析手段得到的能夠標示該中藥主要化學成分特性的色譜圖或光譜圖，其具有特征性、整體性、半定量等特點，近年來已廣泛應用于中藥的分析和檢測。

色譜質譜聯用技術也是近年來發展迅速的一種高端分析技術，其中液相色譜質譜聯用技術（LC-MS）是繼氣相色譜質譜聯用技術（GC-MS）廣泛應用后，逐漸被認識和接受的另一種聯用檢測技術。但由于其儀器價格昂貴，還未得到廣泛應用。超高效液相色譜（UHPLC）-飛行時間質譜聯用儀不僅能將中藥復雜成分快速分離，而且其采用離子化技術，既能解決一些無紫外吸收成分的檢測問題，還能夠得到被離子化的成分的精確分子量，所以這種檢測技術為中藥復方制劑組成成分的結構鑒定和確認提供了很有價值的參考依據。

清毒安腎膠囊是麗珠集團自主研發的中藥新藥，主要用于治療慢性腎功能衰竭、腎功能不全代償期、氮質血癥期和尿毒癥早期。該藥由黃芪、大黃等藥材組成，具有健脾益腎、通腑降濁、活血化瘀之功效。自1996年起，已治療早、中期慢性腎衰患者1000余例。該膠囊能顯著降低血肌酐和尿素氮濃度、增加食欲和尿量、改善腎性貧血。

清毒安腎膠囊的藥品標準中，鑒別項分別以（1）黃芪甲苷對照品；（2）淫羊藿苷對照品；（3）芍藥苷對照品；（4）人參皂苷Rg1和Rb1對照品；（5）大黃對照品；（6）當歸、川芎對照品，按照中國藥典2010年版一部附錄VIB進行薄層色譜法鑒別。含量項規定：按照中國藥典2010版一部附錄VID高效液相色譜法測定，其中每粒含芍藥按芍藥苷（C₂₃H₂₈O₁₁）計算，不得少于0.45mg；每粒含淫羊藿按淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）計算，不得少于0.15mg。

但是，現有的清毒安腎膠囊有效成分的檢測方法還不夠完善，尚不能全面、準確、有效地反映各種有效成分及其含量，不利于該產品的質量控制和臨床應用，也不能明確地將清毒安腎膠囊與其他同類產品區分開來。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于彌補已有技術的不足之處，提供一種清毒安腎膠囊指紋圖譜的建立方法，采用該方法獲得指紋圖譜具有檢測準確性高、可靠的優點，能夠快速、簡便、全面、有效地顯示清毒安腎膠囊的有效成分及其含量。

一方面，本發明提供一種清毒安腎膠囊指紋圖譜的建立方法，該建立方法包括以下步驟：

（1）將清毒安腎膠囊的內容物溶于70%（體積比）的乙醇水溶液，制成濃度為5mg/ml的供試品溶液；

（2）采用高效液相色譜-質譜聯用儀檢測供試品溶液，獲得總離子流圖譜；其中，所述高效液相色譜檢測采用C₁₈反相鍵合硅膠色譜柱，流動相1和流動相2進行梯度洗脫，并以電噴霧檢測器檢測，所述流動相1為0.1%（體積比）的甲酸水溶液，流動相2為0.1%（體積比）的甲酸乙腈溶液，按體積百分比計，所述洗脫梯度如下：

0-0.5分鐘，流動相1為95%，流動相2為5%；

0.5-3分鐘，流動相1由95%勻速變為80%，流動相2由5%勻速變為20%；

3-13分鐘，流動相1由80%勻速變為60%，流動相2由20%勻速變為40%；

13-18分鐘，流動相1由60%勻速變為0，流動相2由40%勻速變為100%；

18-20分鐘，流動相1為0，流動相2為100%。

另一方面，本發明提供一種清毒安腎膠囊有效成分的檢測方法，該檢測方法包括以下步驟：

（1）將清毒安腎膠囊的內容物溶于70%（體積比）的乙醇水溶液，制成濃度為5mg/ml的供試品溶液；

（2）將芍藥苷、淫羊藿苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、阿魏酸、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷、大黃酸和大黃素溶于甲醇制備對照品溶液，各組分濃度均為0.02mg/ml；