[發明專利]檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法

有效

• 申請號: 201210165840.4
• 申請日: 2012-05-25
• 公開（公告）號: CN102721675A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 易龍;糜漫天;陳明亮;金鑫
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.用終濃度為1～200μM的花色苷處理靶細胞，得處理靶細胞；

b.將步驟a所得處理靶細胞先用PBS洗滌，再用胰蛋白酶消化，計數細胞，然后破碎細胞，最后離心收集上清液，備用；

c.將步驟b所得上清液用氮氣干燥，干燥后溶于pH=3～3.5的甲醇溶液中，測定在最大接收波長的熒光強度；

d.準確稱取花色苷，溶于pH=3～3.5的甲醇溶液中，配置成濃度梯度的標準液，然后測定標準液在最大接收波長的熒光強度，根據標準液濃度和熒光強度繪制標準曲線；然后根據標準曲線計算步驟c所得熒光強度的花色苷濃度，用生物利用度=花色苷濃度×樣品體積計算花色苷在靶細胞的生物利用度。

2.根據權利要求1所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步驟a是將花色苷溶于pH=3的甲醇溶液中，然后加入靶細胞中至花色苷終濃度為1～200μM，在37℃、100%飽和濕度、體積分數為5%的CO₂培養箱中培養至少1小時。

3.根據權利要求2所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步驟a是用終濃度為50-200μM的花色苷處理靶細胞。

4.根據權利要求1所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步驟b中，所述胰蛋白酶消化是用質量分數為0.25%～0.5%的胰蛋白酶消化。

5.根據權利要求1所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述破碎細胞為在功率為100W的超聲破碎儀中超聲至少10分鐘；所述離心為在溫度為4℃、12000轉/分鐘條件下離心10分鐘。

6.根據權利要求1所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步驟b中，所述胰蛋白酶消化后，還包括如下步驟，離心收集收集細胞，加入1mL，pH=3.0的甲醇溶液重懸細胞，準確收集1×10⁶個細胞。

7.根據權利要求1所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步驟d中，所述濃度梯度的標準液是將花色苷溶于pH=3的甲醇溶液，配制成花色苷濃度分別為0.1μM，1μM，5μM，10μM，20μM，40μM，80μM，160μM和320μM的標準液。

8.根據權利要求1-7任一項所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述靶細胞為血管內皮細胞，小腸上皮細胞，肝細胞或腫瘤細胞。

9.根據權利要求8所述檢測花色苷在靶細胞生物利用度的方法，其特征在于：所述花色苷為飛燕草素或矢車菊素。