[發明專利]果蠅視網膜發育模型的體外培養系統及其應用

無效

• 申請號: 201210165419.3
• 申請日: 2012-05-25
• 公開（公告）號: CN102757931A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 儲丹丹;陳炯
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12Q1/68;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種果蠅視網膜發育模型體外培養的構建方法，其特征包括以下步驟：

(1)配制用于果蠅視網膜體外培養的器官培養液；

(2)在上述培養液中分離獲得果蠅視網膜，將其置于透氣性的可視容器中，室溫培養；

(3)使用激光共聚焦顯微鏡追蹤記錄視網膜細胞的發育過程。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，器官培養液由體積百分含量的以下組分構成：89％昆蟲細胞培養基(Schneider’s?Drosophila?medium)、10％熱滅活胎牛血清(heat-inactivated?feral?bovine?serum)、1％青霉素-鏈霉素混合溶液(penicillin/streptomycin)，外加0.2mg/ml胰島素(insulin)。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的果蠅視網膜為具有熒光標記的果蠅三齡晚期幼蟲的眼盤(eye?disc)。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將果蠅視網膜浸透在器官培養液中，置于由透氣性底膜(Lumox?dish)，聚三氟氯乙烯(Halocarbon?700oil)和蓋玻片組成的透氣性可視容器中間的液體腔內；液體腔厚度為0.3-0.6毫米。

5.根根權利要求1所述的方法，其特征在于，運用激光共聚焦顯微鏡檢測視網膜發育過程的時間為視網膜放入透氣性可視容器液體腔后5分鐘至三小時；激光掃描間隔時間為10分鐘至3小時，且每次掃描前需要調整焦距至圖像清晰。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，運用激光共聚焦顯微鏡檢測視網膜發育過程時，激光強度設定為0.1％-10％，選取物鏡為60倍或100倍放大。

7.根據權利要求1至6任一權利要求所述的果蠅視網膜發育模型體外培養方法，其特征在于，使用該模型篩選視網膜早期發育相關基因的方法是：分離待篩選的基因突變果蠅的視網膜，以野生型果蠅作為對照，其余培養條件完全相同，培養適當時間后，使用激光共聚焦顯微鏡觀察基因突變果蠅的視網膜發育進程的變化；若有可分辨的發育缺陷產生，則視待篩選基因為視網膜早期發育相關基因。

8.根據權利要求1至7任一權利要求所述的果蠅視網膜發育模型體外培養方法，其特征在于，使用此模型進行藥物毒理學評價的方法是：器官培養液中加入待篩選藥物，以加入等量的空白溶劑作為對照，其余培養條件完全相同，培養適當時間后，使用激光共聚焦顯微鏡觀察待篩選藥物對視網膜發育進程的影響；若有可分辨的發育缺陷產生，則視待篩選藥物為視網膜發育毒性藥物。