[發明專利]基于固相合成的多肽的切割法

有效

• 申請號: 201210165089.8
• 申請日: 2012-05-25
• 公開（公告）號: CN102702305A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 趙恒樂;周純澤;張宏怡;董昱;陳康宜
• 申請（專利權）人: 上海電機學院
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;曾人泉

1.?一種基于固相合成的多肽的切割法，所述的多肽為基于BOC法或FMOC法合成的多肽，其特征在于，包括以下步驟：

（1）配制切割液

首先，配制三種濃度不同的切割液：

切割液I：采用TFA、對甲酚、乙二硫醇、H2O、苯甲硫醚進行配制，它們的配比為16.5:1:1:1:0.5，配制后切割液中TFA的濃度為82.5%；

切割液II：采用TFA、H2O、苯酚、苯甲硫醚、EDT進行配制，它們的配比為17.5:1:0.5:0.5:0.5，配制后切割液中TFA的濃度為87.5%；?

切割液III：采用TFA、三異丙基硅烷、H2O進行配制，它們的配比為38:1:1，配制后切割液中TFA的濃度為95%；

配制切割液時應嚴格按照比例進行配制：先倒入一半的TFA，加入各類添加劑后再倒另一半的TFA；

（2）切割液的選用

切割液的選用標準為：

①肽序中Arg﹥1的選用切割液I；

②肽序中含有1個Arg的選用切割液II；

③肽序中無Arg的選用切割液III；

④肽序中含1個色氨酸，1g樹脂加0.1ml乙二硫醇、0.2ml對甲酚；

肽序中含兩個色氨酸，加雙倍即0.2ml乙二硫醇、0.4ml對甲酚；

其他范圍依此類推；

⑤肽序中含有Met、Cys的，加乙二硫醇；

（3）切割反應時間及溫度控制

①?20肽以下有色氨酸的切割反應時間為2個小時，無色氨酸的切割反應時間為2小時30分鐘；

20肽以上有色氨酸的切割反應時間為2小時10分鐘，無色氨酸的切割反應時間為2小時45分鐘；

②?切割溫度控制在≤25℃；

（4）具體切割步驟

①將所需切割的多肽樹脂倒入離心管，根據肽序中氨基酸的不同選用切割液，倒入切割液的量應保證多肽樹脂浮于離心管內；

②旋緊離心管的蓋子并將管內溶液搖勻后傾斜放置在低速振蕩器中，按步驟（3）所述的切割反應時間及溫度控制進行切割反應；

③待切割反應完全后將樹脂與多肽通過負壓作用從砂芯漏斗中分離出來；

④在分離后得到的溶液中倒入冷乙醚使多肽析出，用離心機對析出的多肽進行離心，使多肽得以沉淀；然后用乙醚清洗多肽2～3遍以洗掉切割液得到較純凈的多肽；

⑤將步驟（4）④獲得的多肽用吹風機將多肽表面的乙醚吹除，再將多肽放入干燥器用油泵抽干乙醚，即可獲得切割下的多肽。