[發明專利]重組轉錄激活子樣效應因子、轉錄激活子樣效應因子核酸酶及其編碼基因及應用

有效

• 申請號: 201210164979.7
• 申請日: 2012-05-23
• 公開（公告）號: CN102702335A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 肖磊;趙金龍;吳昭
• 申請（專利權）人: 上海斯丹賽生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;C12N9/22;C12N15/55;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.一對多肽，其特征在于，氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示。

2.一對編碼權利要求1所述多肽的基因，其特征在于，分別為編碼為SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所述氨基酸序列的核苷酸序列。

3.權利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示。

4.一對重組轉錄激活子樣效應因子，其特征在于，分別含有權利要求1所示SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列。

5.權利要求4所述一對重組轉錄激活子樣效應因子，其特征在于，SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列的多肽分別嵌入在轉錄激活子樣效應因子氨基酸序列的框架內，多肽的兩端分別連接轉錄激活子樣效應因子氨基酸序列框架的N端和C端；

所述轉錄激活子樣效應因子氨基酸序列框架的N端和C端為天然的或經過人工改造的序列。

6.權利要求4或5所述一對重組轉錄激活子樣效應因子，其特征在于，氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6所示。

7.一對重組轉錄激活子樣效應因子的編碼基因，其特征在于，為編碼權利要求5或6所述重組轉錄激活子樣效應因子氨基酸序列的核苷酸序列。

8.權利要求7所述一對重組轉錄激活子樣效應因子的編碼基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示。

9.一對轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶，其特征在于，是由權利要求4～6任一項所述的一對重組轉錄激活子樣效應因子分別與DNA切割蛋白融合形成的融合蛋白。

10.權利要求9所述一對轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶，所述DNA切割蛋白為天然或經人工改造的Fok1DNA內切酶。

11.權利要求9或10一對轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶，其特征在于，氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:9和SEQ?ID?NO:10所示。

12.一對轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶基因，其特征在于，是編碼權利要求9～11任一項所述一對轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶的核苷酸序列。

13.權利要求12所述轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11和SEQ?ID?NO:12所示。

14.一種重組載體，其特征在于，含有權利要求2、3、7、8、12、13任一項所述的核苷酸序列中的任一個。

15.一種宿主細胞，其特征在于，含有權利要求14所述的載體。

16.權利要求15所述宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為人離體細胞。

17.權利要求9～11任一項所述轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶在人胰島素基因的識別和靶向修飾中的應用。

18.權利要求12或13任一項所述轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶基因在人胰島素基因的識別和靶向修飾中的應用。

19.權利要求14所述重組載體在人胰島素基因的識別和靶向修飾中的應用。

20.一種人胰島素基因靶向修飾的方法，其特征在于，將權利要求9～11所述的轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶、權利要求12或13所述轉錄激活子樣效應因子核苷酸酶基因或者權利要求14所述的重組載體轉入人離體細胞，在30～37℃下培養1～4天，得到人胰島素基因被靶向修飾的細胞。