[發(fā)明專利]人源dcf1基因轉(zhuǎn)基因果蠅模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210164601.7
• 申請(qǐng)日: 2012-05-25
• 公開（公告）號(hào): CN102766635A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文鐵橋;蔣萌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/85;A01K67/033
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 陸聰明

1.一種人源dcf1基因轉(zhuǎn)基因果蠅模型的構(gòu)建方法，其特征在于該方法的具體步驟為：a.將人源dcf1基因開放式閱讀框?qū)?yīng)的cDNA序列構(gòu)建入果蠅轉(zhuǎn)基因載體pWIZ中，得到果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf1；

b.將步驟a所得果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf1為材料，利用顯微注射的基因工程技術(shù)手段構(gòu)建并得到人源dcf1轉(zhuǎn)基因果蠅。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人源dcf1基因轉(zhuǎn)基因果蠅模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述的步驟a的具體方法為：

a-1.以人子宮頸癌細(xì)胞HeLa細(xì)胞的cDNA為模版進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物為：

dcf1?primers：????5’-CGGAATTCATGGCGGCGCCGAAGGGG?AG-3’

5’-GCTCTAGATTAAATTTCAGAATGAGCAA-3’)，

得到大小為972bp的dcf1基因開放式閱讀框全長(zhǎng)的目的片段；再用EcoRI和XbaI雙酶切，收集片段；

a-2.用EcoRI和XbaI雙酶切空載體質(zhì)粒pWIZ，收集大片段備用；

a-3.將步驟a-1和步驟a-2所得的兩個(gè)片段連接起來(lái)，得到果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1人源dcf1基因轉(zhuǎn)基因果蠅模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述的步驟b的具體步驟為：

b-1.將轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf1（終濃度0.8?μg/mg）和輔助質(zhì)粒pΔ2-3（終濃度0.2?μg/mg）混合后，將此混合液注入果蠅的受精卵的尾部，并放置在16℃的濕盒中培養(yǎng)；

b-2.待步驟b-1所得的受精卵孵化成幼蟲然后羽化為成蟲后即和野生型w1118交配，挑取子代眼色為紅色的果蠅即為轉(zhuǎn)基因果蠅；

b-3.將步驟b-2所得轉(zhuǎn)基因果蠅和Double?Balance果蠅以及野生型w1118雜交，篩選出基因型為w;UAS-dcf1/UAS-dcf1;+/+的果蠅。