[發明專利]來自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶PCFAE2及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201210164062.7
• 申請日: 2012-05-24
• 公開（公告）號: CN102676468A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 張修國
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/44;A01N61/00;A01P3/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種蛋白，是如下a）或b）或c）的蛋白質：

a）由序列表中序列2第21-569位所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

b）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

c）將序列表中序列2所示的氨基酸序列或序列2第21-569位所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與辣椒疫霉菌致病性相關的由a）衍生的蛋白質。

2.編碼權利要求1所述蛋白的核酸分子。

3.根據權利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子為如下1）或2）或3）或4）所示的基因：

1）其編碼序列是序列表中序列1的第61-1710位核苷酸的DNA分子；

2）其編碼序列是序列表中序列1的第1-1710位核苷酸的DNA分子；

3）在嚴格條件下與1）或2）限定的DNA分子雜交且編碼權利要求1所述蛋白的DNA分子；

4）與1）或2）限定的DNA分子具有90％以上的同源性且編碼權利要求1所述蛋白的DNA分子。

4.下述1）-4）中的任一種生物材料：

1）含有權利要求2或3所述核酸分子的表達盒；

2）含有權利要求2或3所述核酸分子的重組表達載體；

3）含有權利要求2或3所述核酸分子的重組微生物；

4）含有權利要求2或3所述核酸分子的轉基因細胞系。

5.制備權利要求1所述蛋白質的方法，包括將權利要求1所述的蛋白質的編碼基因在生物細胞中進行表達得到權利要求1所述蛋白質的步驟；所述生物細胞為微生物細胞、植物細胞或非人動物細胞。

6.制備表達權利要求1所述蛋白質的重組微生物的方法，包括將權利要求1所述的蛋白質的編碼基因導入宿主微生物細胞，得到表達權利要求1所述蛋白質的重組微生物的步驟。

7.權利要求1所述蛋白質、權利要求2或3所述的核酸分子或權利要求4所述的生物材料的應用，其特征在于：所述應用為下述1）-3）中任一種：

1）權利要求1所述的蛋白質在作為阿魏酸酯酶中的應用；

2）權利要求1所述的蛋白質在調控辣椒疫霉菌致病性中的應用；

3）權利要求2或3所述的核酸分子或權利要求4所述的生物材料在制備阿魏酸酯酶中的應用。

8.一種鑒定辣椒疫霉菌殺菌劑的方法，包括如下a）-e）中的任一步驟：

a）鑒定所述待檢測物質是否抑制權利要求1所述蛋白質的表達，如所述待測物質能抑制權利要求1所述蛋白質的表達，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能抑制權利要求1所述蛋白質的表達，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；

b）鑒定所述待檢測物質是否降低權利要求1所述蛋白質的表達水平，如所述待測物質能降低權利要求1所述蛋白質的表達水平，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能降低權利要求1所述蛋白質的表達水平，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；

c）鑒定所述待檢測物質是否抑制權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄，如所述待測物質能抑制權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能抑制權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；

d）鑒定所述待檢測物質是否降低權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平，如所述待測物質能降低權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能降低權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；

e）鑒定所述待檢測物質是否使權利要求1所述蛋白質失活，如所述待測物質能使權利要求1所述蛋白質失活，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能使權利要求1所述蛋白質失活，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑。

9.具有如下1）-5）中至少一種功能的物質在制備辣椒疫霉菌殺菌劑中的應用：

1）抑制權利要求1所述蛋白質的表達；

2）抑制權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄；

3）降低權利要求1所述蛋白質的表達水平；

4）降低權利要求1所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平；

5）使權利要求1所述蛋白質失活。

10.擴增權利要求2或3所述的核酸分子的全長或其任意片段的引物對。