[發(fā)明專利]一對轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶及其編碼基因與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210163376.5
• 申請日: 2012-05-23
• 公開（公告）號: CN102702331A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖磊;趙金龍;吳昭
• 申請（專利權(quán)）人: 上海斯丹賽生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N15/11;C12N9/22;C12N15/55;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.一對短肽，其特征在于，所述一對短肽分別具有如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。

2.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權(quán)利要求1所述的一對短肽。

3.如權(quán)利要求2所述一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別具有如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的堿基序列。

4.一對蛋白質(zhì)，其特征在于，所述一對蛋白質(zhì)由權(quán)利要求1所述的一對短肽兩端分別加上轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子氨基酸序列框架的N端和C端組成；其中，所述的轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子氨基酸序列框架的N端和C端為天然的或經(jīng)過人工改造的序列。

5.如權(quán)利要求4所述一對蛋白質(zhì)，其特征在于，所述一對蛋白質(zhì)分別具有如SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列。

6.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權(quán)利要求4或5所述的一對蛋白質(zhì)。

7.如權(quán)利要求6所述一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別具有如SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示的堿基序列。

8.一對融合蛋白，其特征在于，所述一對融合蛋白由權(quán)利要求4所述的一對蛋白質(zhì)分別與DNA切割蛋白融合而成。

9.如權(quán)利要求8所述一對融合蛋白，其特征在于，所述的一對蛋白質(zhì)分別與DNA切割蛋白的二個亞基融合。

10.如權(quán)利要求9所述一對融合蛋白，其特征在于，所述的DNA切割蛋白為天然的或經(jīng)過人工改造的Fok1DNA內(nèi)切酶。

11.如權(quán)利要求8-10任一權(quán)利要求所述一對融合蛋白，其特征在于，所述一對融合蛋白分別具有如SEQ?ID?NO.9和SEQ?ID?NO.10所示的氨基酸序列。

12.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權(quán)利要求8-10任一權(quán)利要求所述的一對融合蛋白。

13.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權(quán)利要求11所述的一對融合蛋白。

14.如權(quán)利要求13所述的一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別具有如SEQ?ID?NO.11和SEQ?ID?NO.12所示的堿基序列。

15.一種包含權(quán)利要求2-3、6-7、13或14任一權(quán)利要求所述一對多核苷酸中的任意一條多核苷酸的載體。

16.一種用權(quán)利要求15所述載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。

17.一種包含權(quán)利要求12所述一對多核苷酸中的任意一條多核苷酸的載體。

18.一種用權(quán)利要求17所述載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。

19.如權(quán)利要求16或18所述宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為人離體細(xì)胞。

20.一種如權(quán)利要求11所述一對融合蛋白或如權(quán)利要求14所述一對多核苷酸在對人RPE65基因靶向修飾中的應(yīng)用。

21.一種人RPE65基因打靶的方法，其特征在于，包括：將權(quán)利要求11所述一對融合蛋白或者權(quán)利要求13或14所述一對多核苷酸或者含有權(quán)利要求13或14所述一對多核苷酸的載體轉(zhuǎn)入人離體細(xì)胞，于30-37℃擴(kuò)增培養(yǎng)1-4天，得到RPE65基因被靶向修飾的細(xì)胞。

22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，所述人離體細(xì)胞中還轉(zhuǎn)入有抗puro蛋白或能表達(dá)抗puro蛋白的質(zhì)粒。