[發明專利]一種鑒定中外豬種的方法

有效

• 申請號: 201210163257.X
• 申請日: 2012-05-23
• 公開（公告）號: CN102816837A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 方美英;白瑩;陳剛;張吉斌;董新星;徐芹芹
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;A01K67/027
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.用于鑒定中外豬種的遺傳標記，其特征在于，其位于豬CYB5基因5'啟動子區上，它的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，根據該序列中SNP位點的不同來鑒定中國豬種和國外豬種，所述SNP位點為位于CYB5基因起始密碼子上游-660bp、-380bp或-69bp中的一個或多個；

其中，中國豬種CYB5基因啟動子序列中-660bp、-380bp、-69bp處堿基分別為單堿基缺失、C、T，國外豬種CYB5基因啟動子序列中-660bp、-380bp、-69bp處堿基分別為G、T、C。

2.一種鑒定中外豬種的方法，其特征在于，根據待測豬CYB5基因啟動子的SEQ?ID?No.2所示序列中SNP位點的不同來鑒定中國豬種和國外豬種，所述SNP位點為位于CYB5基因起始密碼子上游-660bp、-380bp或-69bp中的一個或多個；

其中，中國豬種CYB5基因啟動子序列中-660bp、-380bp、-69bp處堿基分別為單堿基缺失、C、T，國外豬種CYB5基因啟動子序列中-660bp、-380bp、-69bp處堿基分別為G、T、C。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測豬的基因組DNA；

2)以待測豬的基因組DNA為模版，利用特異性引物對擴增包括待測豬CYB5基因啟動子序列中不同SNP位點的片段；

其中，所述SNP位點為位于CYB5基因起始密碼子上游-660bp、-380bp或-69bp中一個或多個；

3)檢測PCR擴增產物。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2)中所述引物對為：

i)上游引物5’-AAGGAGGAGGTAAGCAATG-3’和下游引物5’-GAGATGAGCGGAACAGAGT-3’；或

ii)上游引物5’-TGGGTCAACAGCGAGATA-3’和下游引物5’-CCTCCGTAGAACGAGTGTA-3’；或

iii)上游引物5’-CGCCTGCCACAATGAACC-3’和下游引物5’-GCGCAGAAGGGGATGATG-3’；或

iv)上游引物5’-TGAGCGGAACAGAGTGGG-3’和下游引物5’-AATCATCGGAGGTCGTGC-3’。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟3)所述檢測PCR擴增產物的方法為：

步驟2)中擴增使用的引物對為i)或ii)，檢測擴增產物的方法為測序；

步驟2)中擴增使用的引物對為iii)，檢測擴增產物的方法為焦磷酸測序；或

步驟2)中擴增使用的引物對為iv)，檢測擴增產物的方法為RFLP檢測。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，當步驟2)中擴增使用的引物對為iii)時，對擴增產物進行焦磷酸測序時使用的測序引物為5’-TGGAGTGGCTGGCGA-3’。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，當步驟2)中擴增使用的引物對為iv)時，用限制性內切酶FspBI酶切擴增產物，并對酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳結果呈現2條帶的為中國豬種，僅為1條帶的為國外豬種。

8.用于鑒定中外豬種的PCR引物，其包括以下引物中的一對或多對：

i)上游引物5’-AAGGAGGAGGTAAGCAATG-3’和下游引物5’-GAGATGAGCGGAACAGAGT-3’；

ii)上游引物5’-TGGGTCAACAGCGAGATA-3’和下游引物5’-CCTCCGTAGAACGAGTGTA-3’；

iii)上游引物5’-CGCCTGCCACAATGAACC-3’和下游引物5’-GCGCAGAAGGGGATGATG-3’；或

iv)上游引物5’-TGAGCGGAACAGAGTGGG-3’和下游引物5’-AATCATCGGAGGTCGTGC-3’。

9.含有權利要求8所述引物的用于鑒定中外豬種的試劑盒。

10.權利要求1所述用于鑒定中外豬種的遺傳標記在豬分子標記輔助育種中的應用。