[發(fā)明專(zhuān)利]制備7α-甲氧基頭孢菌素C的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210162720.9
• 申請(qǐng)日: 2012-05-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103421025A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳代杰;李繼安;邵雷;黃娟娟;陳舟舟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院
• 主分類(lèi)號(hào): C07D501/57
• 分類(lèi)號(hào): C07D501/57;C07D501/12
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 陳長(zhǎng)會(huì);謝燕軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于制藥工程領(lǐng)域，具體涉及一種制備高純度7α-甲氧基頭孢菌素C(7α-Methoxycephalosporin?C)的方法。

背景技術(shù)

頭孢菌素類(lèi)抗生素是抗感染藥物中發(fā)展較早，應(yīng)用較廣的一大類(lèi)。其中于20世紀(jì)70年代初發(fā)展起來(lái)的7α-甲氧基頭孢菌素(其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式I)，由于在β-內(nèi)酰胺環(huán)上的C7位有一個(gè)反式甲氧基，阻止內(nèi)酰胺環(huán)與酶分子的接近，進(jìn)而提高了藥物對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性。對(duì)于這類(lèi)藥物的研究是最近發(fā)展比較迅速的一個(gè)前沿領(lǐng)域。

甲氧頭孢菌素類(lèi)抗生素已有多種產(chǎn)品上市，包括頭孢米諾、頭孢美唑等。這類(lèi)藥物共同的半合成中間體為甲氧基頭孢菌素。甲氧基頭孢菌素的合成一般可以通過(guò)化學(xué)合成法和微生物轉(zhuǎn)化法。化學(xué)法是目前業(yè)內(nèi)普遍采用的方法，主要研究方向都是以7-ACA為原料進(jìn)行合成，例如中國(guó)專(zhuān)利CN200910075806.6報(bào)道了以7-ACA為原料，和甲巰四氮唑反應(yīng)得到7-TMCA，7-TMCA和甲基硫溴進(jìn)行亞胺化反應(yīng)，然后與二苯重氮甲烷反應(yīng)得到中間體，中間體和甲基化試劑甲基化反應(yīng)，得到可以用于合成甲氧頭孢類(lèi)藥物的中間體7-MAC。另外，中國(guó)專(zhuān)利CN101210019A報(bào)道了以C4，7位保護(hù)、C3位鹵甲基的頭孢化合物為原料，合成甲氧基頭孢菌素中間體。但這些化學(xué)合成的方法普遍存在有機(jī)溶媒使用量大，能耗嚴(yán)重等問(wèn)題。而用生物轉(zhuǎn)化的方法可以有效的解決這些問(wèn)題，利用生物轉(zhuǎn)化得到的甲氧頭孢菌素C作為合成甲氧頭孢菌素類(lèi)抗生素，對(duì)于清潔生產(chǎn)，降低能耗等方面都有顯著優(yōu)勢(shì)。

文獻(xiàn)(The?Conversion?of?Cephalosporins?to?7α-Methoxycephalosporins?by?Cell-Free?Extract?of?Streptomyces?clavuligerus.Biochem.J，1980，186：613-616)報(bào)道利用棒狀鏈霉菌(Streptomyces?clavuligerus，ATCC27064)細(xì)胞破碎后的粗酶液，加入輔因子和頭孢菌素C底物，轉(zhuǎn)化得到7α-甲氧基頭孢菌素C，但是目前尚無(wú)報(bào)道從轉(zhuǎn)化體系中將產(chǎn)物7α-甲氧基頭孢菌素C分離純化的方法。另有文獻(xiàn)(Non-radioactive?assay?and?HPLC?analysis?of?cephalosporin?C?7α-methocxylation?by?cell-free?extracts?of?Streptomyces?clavuligerus.Appl?Microbiol?Biotechnol，1991，35：793-797)報(bào)道化學(xué)合成7α-甲氧基頭孢菌素C的方法，首先耦合α-二苯甲基-N-t-丁酮-D-α-氨基己二酯和二苯甲基-7-氨基頭孢菌酸酯，得到N-t-丁酮-bis-二苯甲基酯的CPC，然后以甲醇鋰鹽作為甲基供體，進(jìn)行添加甲氧基的反應(yīng)，最后脫去羥基和氨基的保護(hù)基團(tuán)，得到7α-甲氧基頭孢菌素C。在化學(xué)合成過(guò)程中，使用了較多的化學(xué)試劑，反應(yīng)復(fù)雜。雖然在化學(xué)合成過(guò)程中，通過(guò)有機(jī)溶劑萃取、旋蒸等步驟可以得到純度90％以上的7α-甲氧基頭孢菌素C，但是由于生物轉(zhuǎn)化后體系與化學(xué)合成體系有很大差異，因而報(bào)道的分離甲氧基頭孢菌素C的方法并不適用于從轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中純化甲氧基頭孢菌素C。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明涉及一種制備高純度7α-甲氧基頭孢菌素C的方法，該方法不僅工藝簡(jiǎn)單，能夠很好的去除結(jié)構(gòu)十分類(lèi)似的轉(zhuǎn)化底物、中間產(chǎn)物等雜質(zhì)，且獲得甲氧基頭孢菌素C的收率和純度都很高。

因此，本發(fā)明提供一種制備7α-甲氧基頭孢菌素C的方法，其特征在于所述方法包括通過(guò)轉(zhuǎn)化液前處理、吸附樹(shù)脂層析處理和反相硅膠柱層析處理，從將頭孢菌素C底物轉(zhuǎn)化為7α-甲氧基頭孢菌素C的轉(zhuǎn)化液中制備7α-甲氧基頭孢菌素C的步驟。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述方法包括下列步驟：

a)在每毫升轉(zhuǎn)化液中加入30-70μl的冰醋酸混勻，使轉(zhuǎn)化液中的大部分蛋白變性沉淀，抽濾取澄清的濾液，用酸調(diào)pH值為3.0-5.0，即為上柱母液；

b)將獲得的上柱母液緩慢通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂層析柱；用pH為2.5-4.5的酸水洗滌柱子2-6CV(柱體積)；然后用含10％-40％(v∶v)、優(yōu)選15-30％(v∶v)低脂肪醇的水溶液，2-5CV洗脫柱子，分步收集并HPLC檢測(cè)流出液；將7α-甲氧基頭孢菌素C?HPLC純度大于15％的收集瓶合并，調(diào)pH3.0-5.0，減壓真空旋蒸濃縮獲得濃縮液。