[發(fā)明專利]制備頭霉素C的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210162672.3
• 申請日: 2012-05-21
• 公開（公告）號: CN103421024A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李繼安;陳代杰;陳舟舟;方敏;黃娟娟;李夢茜;郭兆霞;尚秀婷;鄧昕
• 申請（專利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院
• 主分類號: C07D501/57
• 分類號: C07D501/57;C07D501/12
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 陳長會;謝燕軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于制藥工程領(lǐng)域，具體涉及一種制備高純度頭霉素C(Cephamycin?C)的方法。

背景技術(shù)

頭霉素C最早由美國的Lilly研究室于1971年發(fā)現(xiàn)的。由于其頭孢烯母核C₇位上反式甲氧基的存在，可以阻止內(nèi)酰胺環(huán)與酶分子的接近，提高β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性。它不僅為頭孢菌素類抗生素提供了更廣泛的來源，也為頭孢菌素的化學(xué)改造開創(chuàng)了一種新的類型-7α-甲氧基頭孢菌素，也就是頭霉素類抗生素。

頭霉素C(Cephamycin?C)的化學(xué)結(jié)構(gòu)

目前頭霉素類抗生素已發(fā)展到第三代，第二、三代頭霉素類的合成，都是從第一代頭霉素C開始合成的。隨著第二、三代頭霉素類抗生素的廣泛應(yīng)用，頭霉素C作為原料藥越來越受到重視。

已報道的頭霉素C的制備方法工藝復(fù)雜、收率較低、純度不是很高，且最終獲得的頭霉素C有少量的色素存在。美國專利US?4332891報道了頭霉素C的提取純化工藝，采用兩種樹脂吸附的方法，先經(jīng)陰離子樹脂吸附，經(jīng)蒸餾水洗滌后，以NaCl溶液洗脫頭霉素C，再用大孔吸附樹脂吸附，以蒸餾水洗脫。這種方法的缺點是收率低、純度不高，同時在終產(chǎn)物溶液中有少量色素存在。CN?101134759B報道了一種頭霉素C的分離純化工藝，其先用大孔吸附樹脂吸附，再用蒸餾水洗滌吸附樹脂，然后用含醇的水溶液洗脫頭霉素C，即得到頭霉素C的溶液。該方法工藝簡單，收率較高，但得到的產(chǎn)物純度較低。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本申請人發(fā)明了一種制備高純度頭霉素C的方法，該方法不僅工藝簡單，能夠很好的去除色素類雜質(zhì)，且獲得頭霉素C的收率和純度都很高。

因此，本發(fā)明提供一種制備頭霉素C的方法，所述方法包括通過發(fā)酵液前處理、吸附樹脂處理和反相硅膠柱層析處理，從頭霉素C的發(fā)酵液中制備頭霉素C的步驟。

具體地，所述方法包括以下步驟：

a)發(fā)酵液離心取上清，用酸將pH值調(diào)為3.0-6.0，減壓真空旋蒸濃縮至發(fā)酵液體積的50％左右，加入濃縮液體積2-4倍的低脂肪醇沉淀去除蛋白類雜質(zhì)，再減壓真空旋蒸去除部分低脂肪醇，即獲得澄清的上柱母液；

b)將獲得的上柱母液調(diào)pH值至2.0-6.0，并緩慢通過大孔吸附樹脂層析柱，除去色素和部分雜質(zhì)，收集上柱流出液；

c)用pH值為3.0-5.0的酸水預(yù)處理十八烷基(C18)或八烷基(C8)鍵合硅膠層析柱，并將b)中收集的上柱流出液的pH值調(diào)為2.5-5.5，緩慢通過上述C18或C8反相硅膠柱；然后用pH值為3.0-5.0的酸水洗滌柱子5-8CV，再用3-5CV的純水洗滌柱子；然后加入含4％-10％(v∶v)低脂肪醇的水溶液，5-10CV洗脫柱子，分步收集并HPLC檢測流出液；并將純度大于預(yù)定值(優(yōu)選大于88.0％)的部分合并，減壓真空旋蒸濃縮后凍干，制得頭霉素C無定型粉末。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，a)步驟中所用的酸為鹽酸或者硫酸，優(yōu)選為鹽酸。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，a)步驟中發(fā)酵液離心取上清后，優(yōu)選pH值調(diào)為3.5-4.5。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，a)步驟中低脂肪醇為甲醇、乙醇、丙酮或異丙醇，優(yōu)選為甲醇或乙醇。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，a)步驟中沉淀去除雜質(zhì)所用低脂肪醇的體積為濃縮液體積的2-4倍，優(yōu)選為3倍。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，b)步驟中上大孔吸附樹脂的上柱母液的pH值優(yōu)選4.5-5.5。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，b)步驟中大孔吸附樹脂為市售常用聚苯乙烯-二乙烯苯型大網(wǎng)格中等極性樹脂，其比表面積≥300m²/g，特征孔徑為調(diào)和粒徑250-840μm。優(yōu)選羅門哈斯公司XAD-4、XAD-2或者XAD-18型樹脂，最優(yōu)選為XAD-4樹脂。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，c)步驟中的酸水指含有少量酸的水溶液，所述酸為硫酸或鹽酸，優(yōu)選為鹽酸。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，c)步驟中酸水的pH值優(yōu)選3.0-4.0。

根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，c)步驟中八烷基(C8)或十八烷基(C18)鍵合硅膠填料為球形親水型或非親水型，優(yōu)選親水型，其中C8型特征孔徑為調(diào)和粒徑為10-60μm；C18型特征孔徑為調(diào)和粒徑為50-70μm。優(yōu)選蘇州賽分科技有限公司填料GP-C18，GP-C8，HP-C18；上海大有色譜技術(shù)服務(wù)有限公司填料DYB71306和DYB71326。