[發(fā)明專利]用于增加紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶解度的寡肽

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210162524.1
• 申請(qǐng)日: 2012-05-18
• 公開（公告）號(hào): CN103421085A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張繼穩(wěn);郭濤;李海燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;A61K47/48;A61K47/42;A61K31/337;A61P35/00
• 代理公司: 北京金信立方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11225
• 代理人: 朱梅;徐琳

1.一種用于增加紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶解度的寡肽，所述寡肽能夠通過(guò)非共價(jià)的超分子相互作用與紫杉醇分子或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物分子結(jié)合，其中，所述寡肽由3～20個(gè)氨基酸組成，其中，所述寡肽分子的結(jié)構(gòu)包括在N端含有1~3個(gè)含有苯環(huán)的氨基酸，在寡肽分子的各個(gè)位置共含有1~10個(gè)氫鍵受體或氫鍵供體的官能團(tuán)以及在N端或者從N端起三分之二區(qū)域包含所述寡肽的疏水區(qū)域的相對(duì)空間位置特征，從而使所述寡肽與紫杉醇進(jìn)行空間對(duì)接，而在C端含有1-4個(gè)親水基團(tuán)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于增加紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶解度的寡肽，其中，所述含有苯環(huán)的氨基酸為色氨酸或苯丙氨酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于增加紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶解度的寡肽，其中，所述氫鍵受體或氫鍵供體的官能團(tuán)由選自Asp、Asn、Glu、Lys、Gln、Arg、Ser、Thr和Cys中的氨基酸提供。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于增加紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶解度的寡肽，其中，所述親水基團(tuán)由選自Gly、Asp、His、Asn、Glu、Lys、Gln、Arg、Ser、Thr和Cys中的氨基酸提供。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于增加紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶解度的寡肽，其中，所述寡肽的序列選自下列序列中：Nterminal-W(L)FFAREKD-C?terminal、N?terminal-W(L)FFSREKD-C?terminal、N?terminal-W(L)FFGREKD-C?terminal、N?terminal-W(D)FFAREKD-Cterminal、N?terminal-W(D)FFSREKD-C?terminal和Nterminal-W(D)FFGREKD-C?terminal。

6.權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的寡肽與紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的復(fù)合物，其中，紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物與所述寡肽的質(zhì)量比例為1:100~1:0.01，優(yōu)選為1:0.5。

7.權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的寡肽與紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的復(fù)合物的制備方法，所述方法包括：將紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物配制成極性有機(jī)溶劑水溶液，并加入寡肽水溶液，攪拌后，蒸發(fā)除去極性有機(jī)溶劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其中，紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物與所述寡肽的質(zhì)量比例為1:100~1:0.01，優(yōu)選為1:0.5。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其中，所述方法包括以下步驟：

1）使用極性有機(jī)溶劑配體積分?jǐn)?shù)在60%-90%之間的極性有機(jī)溶劑的水溶液；

2）稱取適量的紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物，用極性溶劑的水溶液溶解并定容得到0.5–10mg/mL的紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的等摩爾濃度的溶液；

3）稱取適量的權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的寡肽，用水溶解并定容得到濃度為0.3-2.7μg·mL^-1的寡肽水溶液；

4）將紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的極性溶劑水溶液和寡肽水溶液混合，并于50～70℃攪拌1～6小時(shí)，其中攪拌速率優(yōu)選為300r·min^-1；

5）蒸發(fā)除去極性有機(jī)溶劑。

10.一種增加紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶解度的方法，其包括：

（1）寡肽分子的設(shè)計(jì)步驟

1）根據(jù)紫杉醇分子或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物分子的空間結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選擇合適的氨基酸單體；

2）將氨基酸單體進(jìn)行適當(dāng)組合后，在Amber軟件下，對(duì)氨基酸序列在隱性水環(huán)境中以50K為步長(zhǎng)進(jìn)行逐漸升溫，然后穩(wěn)定在300K下跑250ns的動(dòng)力學(xué)，最終得到穩(wěn)定的寡肽構(gòu)象；

3）使用對(duì)接軟件Auto?Dock?Vina將優(yōu)化后的寡肽分子對(duì)接到紫杉醇分子或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物分子上，得到粗略的復(fù)合物結(jié)構(gòu)和估計(jì)的結(jié)合自由能，并以此為參考篩選效果最好的寡肽分子，對(duì)于AutoDock?Vina程序，搜索空間限定在以紫杉醇分子中心為中心，的區(qū)域內(nèi)，每次產(chǎn)生10個(gè)最優(yōu)構(gòu)象，共進(jìn)行5次并行操作，以結(jié)合自由能最低的構(gòu)象作為最終構(gòu)象；

4）對(duì)寡肽中的氨基酸殘基進(jìn)行增減或者調(diào)整次序，重新組合后再優(yōu)化、再對(duì)接篩選，直至找到與紫杉醇的結(jié)合自由能更低、空間位置更加匹配的寡肽；

（2）寡肽增溶紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的溶液配制方法

1）使用極性有機(jī)溶劑配體積分?jǐn)?shù)在60%-90%（優(yōu)選80%）之間的極性有機(jī)溶劑的水溶液；

2）稱取適量的紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物，用極性溶劑的水溶液溶解并定容得到0.5–10mg/mL的紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的等摩爾濃度的溶液；

3）稱取適量的寡肽，用水溶解并定容得到濃度為0.3-2.7μg·mL^-1的寡肽水溶液；

4）將紫杉醇或以紫杉醇結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的類似藥物的極性溶劑水溶液和寡肽水溶液混合于具塞錐形瓶中，將錐形瓶置于磁力攪拌器上，于50～70℃攪拌1～6小時(shí)，其中攪拌速率優(yōu)選為300r·min^-1；

5）將錐形瓶中液體轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去極性有機(jī)溶劑后，用水少量多次將剩余物轉(zhuǎn)移至容量瓶中，并定容；

6）取上述溶液過(guò)濾膜后，取濾液進(jìn)入高效液相色譜測(cè)定紫杉醇含量。