[發明專利]一種人氧化低密度脂蛋白的酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法、用途

有效

• 申請號: 201210160797.2
• 申請日: 2012-05-22
• 公開（公告）號: CN102680710A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 徐燕華;陳英;萬方
• 申請（專利權）人: 成都華神生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;全學榮

1.一種人氧化低密度脂蛋白的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：它包含如下成分：

（1）包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗體的酶標板；

（2）人氧化低密度脂蛋白系列標準品：

標準品1：每升標準品1含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖；

標準品2：每升標準品2含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和1U氧化低密度脂蛋白；

標準品3：每升標準品3含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和2U氧化低密度脂蛋白；

標準品4：每升標準品4含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和4U氧化低密度脂蛋白；

標準品5：每升標準品5含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和8U氧化低密度脂蛋白；

標準品6：每升標準品6含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和16U氧化低密度脂蛋白；

（3）酶標記抗體：為過氧化物酶或辣根過氧化酶標記的羊抗人載脂蛋白B抗體；

（4）稀釋液；

（5）洗滌液；

（6）底物液；

（7）終止液。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括質控物：

高質控物：每升高質控物含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和13U氧化低密度脂蛋白；

低質控物：每升低質控物含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和1.5U氧化低密度脂蛋白。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：步驟（1）所述的包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗體的酶標板是按照如下方法制備的:

a、抗體稀釋：用pH為8.0的50mM的Tris-HCl緩沖溶液將抗人氧化低密度脂蛋白單克隆抗體稀釋到2.5~20μg/ml，得包被液；

b、包被：取微孔板，用洗滌液洗滌3次，加入上述含抗人氧化低密度脂蛋白單克隆抗體的包被液，每孔100μl/孔，4℃孵育12小時；

c、封閉：傾去包被液，置于吸水紙上輕拍幾次，去除殘液，加入含1%牛血清白蛋白和5%蔗糖的濃度為50mmol/L的Tris-HCl封閉液，其pH為8.0，300μl/孔，室溫，1小時；

d、真空干燥，密封，即得包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗體的酶標板。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述的抗人氧化低密度脂蛋白單克隆抗體是由保藏號為CCTCC?NO：C?200304的雜交瘤細胞系產生的。

5.根據權利要求1或者2所述的試劑盒，其特征在于：所述的氧化低密度脂蛋白的制備方法如下：

ⅰ、取低密度脂蛋白，溶于10mM磷酸鹽緩沖液中，其中，低密度脂蛋白的濃度為5mg/ml；

ⅱ、取步驟ⅰ的磷酸鹽緩沖液，加入硫酸銅，使其終濃度為2μmol/L，37℃反應2小時；

ⅲ、再加入乙二胺四乙酸，使其終濃度為0.01%（w/v），終止反應，透析，即得氧化低密度脂蛋白。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述稀釋液是每升含NaCl?40g，NaH₂PO₄·2H₂O1.184g，Na₂HPO₄·12H₂O11.6g，牛血清白蛋白50g的水溶液；

所述洗滌液是每升含NaCl?68g，NaH₂PO₄·2H₂O?6.22g，Na₂HPO₄·12H₂O61g，Tween-2021ml的水溶液；

所述底物液包含底物液A和底物液B，底物液A是含有TMB的水溶液，底物液B是含有H₂O₂的水溶液；

所述終止液是每升含有濃硫酸108ml的水溶液。

7.權利要求1-6任意一項所述的試劑盒的使用方法，其特征在于：它包含下列步驟：

Ⅰ、樣品前處理；

Ⅱ、用權利要求1-6任一項所述的試劑盒進行檢測；

Ⅲ、結果處理與分析。