[發(fā)明專利]向蘿卜肉質根中引入熒光示蹤劑的方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210160733.2
• 申請日: 2012-05-22
• 公開（公告）號: CN102680670A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 王紹輝;楊瑞;楊柳;程繼鴻;王建立;杜鮮云;房克鳳
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.向蘿卜肉質根中引入熒光示蹤劑的方法，包括如下步驟：在蘿卜植株功能葉的葉柄表面制造傷口，然后用2.5mM的EDTA水溶液沖洗所述葉柄，然后采用9-19分鐘將50-200微升熒光素CFDA溶液滴加至所述葉柄上；所述熒光素CFDA溶液中，熒光素CFDA的濃度為1mg/mL。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述制造傷口的方法為：用砂布摩擦所述葉柄的表皮。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：每個蘿卜植株對一個所述功能葉的葉柄表面制造傷口。

4.如權利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述熒光素CFDA溶液是用稀釋液稀釋熒光素CFDA母液得到的；所述熒光素CFDA母液的制備方法為：用丙酮溶解熒光素CFDA，使熒光素CFDA的濃度為25mg/mL，得到熒光素CFDA母液；所述稀釋液由Mes-Tris和山梨醇和水組成，Mes-Tris的濃度為5mM，山梨醇的濃度為300mM。

5.如權利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述蘿卜的品種為‘北農1號’；所述蘿卜植株為從“拉十字”開始計時第0至35天間的蘿卜植株。

6.權利要求1至5中任一所述方法在檢測蘿卜肉質根的同化物卸載中的應用。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于：從滴加完所述熒光素溶液開始計時，4小時后將所述蘿卜植株的肉質根切片，用熒光顯微鏡進行熒光觀察和透射觀察。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于：所述熒光觀察的參數為：激發(fā)光波長480nm，發(fā)射光波長515nm。

9.如權利要求6至8中任一所述的應用，其特征在于：分別將不同發(fā)育階段的蘿卜植株進行權利要求1至5中任一所述的方法，通過所述熒光觀察和所述透射觀察判斷蘿卜肉質根的同化物卸載過程。

10.如權利要求6至9中任一所述的應用，其特征在于：所述蘿卜植株為從“拉十字”開始計時第0至35天間的蘿卜植株。