[發(fā)明專(zhuān)利]桑葉中1-脫氧野尻霉素的提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210159880.8
• 申請(qǐng)日: 2012-05-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102675188A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李強(qiáng);季更生;谷緒頂;費(fèi)娟娟;吳再?gòu)?qiáng)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07D211/46
• 分類(lèi)號(hào): C07D211/46
• 代理公司: 南京蘇高專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種桑葉中1-脫氧野尻霉素的提取方法，特別涉及一種纖維素酶產(chǎn)生菌輔助提取桑葉中1-脫氧野尻霉素的方法。

背景技術(shù)

現(xiàn)代藥理研究表明桑葉有效成分之一多羥基生物堿具有顯著的降血糖作用，而1-脫氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，DNJ)為桑葉中主要的生物堿(一種糖苷酶抑制劑)，是降血糖的主要活性成分。此外，1-脫氧野尻霉素還具有抗病毒、抑制腫瘤等功能。目前，1-脫氧野尻霉素的市場(chǎng)價(jià)格昂貴（98％純度1-脫氧野尻霉素約20萬(wàn)元/克），如果其生產(chǎn)成本降低，其應(yīng)用領(lǐng)域還將進(jìn)一步擴(kuò)大。微生物發(fā)酵可以產(chǎn)生1-脫氧野尻霉素。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)枯草桿菌、放線菌等微生物可以發(fā)酵產(chǎn)1-脫氧野尻霉素。但是它們的產(chǎn)量較低，一般為0.01g/L左右。由于產(chǎn)量極低，目前僅僅局限于菌株初步篩選和改造，沒(méi)有開(kāi)展大規(guī)模發(fā)酵制備1-脫氧野尻霉素的嘗試。利用桑樹(shù)廢棄物為原料生產(chǎn)1-脫氧野尻霉素具有巨大的潛力。其優(yōu)點(diǎn)在于原料來(lái)源豐富，價(jià)格低廉，是生產(chǎn)1-脫氧野尻霉素等活性物質(zhì)的理想原料。因此很有必要建立一種高效的1-脫氧野尻霉素提取方法。

目前桑葉中1-脫氧野尻霉素提取工藝的報(bào)道較少，而且提取效率低、成本高。目前1-脫氧野尻霉素的提取多采用溶劑提取法和酸提取法。溶劑提取主要采用乙酸乙酯、乙醇和石油醚等溶劑分部提取；而酸提取法主要采用稀鹽酸和稀硫酸提取桑葉中的1-脫氧野尻霉素。乙醇提取率（1-脫氧野尻霉素的提取量×100％/所用桑組織的質(zhì)量）為0.00139％，蒸餾水提取法提取率為0.00121％，稀酸提取效率為0.00147％。因此，桑樹(shù)中1-脫氧野尻霉素提取效率較低成為1-脫氧野尻霉素制備的瓶頸問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容：

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是提供了一種提取效率高、成本低的桑葉中1-脫氧野尻霉素的提取方法。

技術(shù)方案：本發(fā)明所述的桑葉中1-脫氧野尻霉素的提取方法，包括以下步驟：

（1）發(fā)酵：將桑葉加入纖維素酶產(chǎn)生菌種子液中，恒溫振蕩培養(yǎng)得到發(fā)酵液；

（2）提取及純化：采用酸提取法或醇提取法提取發(fā)酵液，將所得提取液純化，得到1-脫氧野尻霉素。

其中，步驟（1）中，所述纖維素酶產(chǎn)生菌種子液由纖維素酶產(chǎn)生菌于產(chǎn)酶培養(yǎng)基中恒溫振蕩培養(yǎng)制得。為了獲得更好的培養(yǎng)效果，采用的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為26～35℃，振蕩速度為150～180r/min，培養(yǎng)時(shí)間為3～5天。為了使纖維素酶產(chǎn)生菌對(duì)桑葉的纖維素充分降解，本發(fā)明優(yōu)化了發(fā)酵條件：所述纖維素酶產(chǎn)生菌為里氏木霉(Trichoderma?reseei?ATCC?26921)、康寧木霉（Trichoderma?koningii?CICC?13012）、綠色木霉（Trichoderma?viride?CICC?40502）或黑曲霉(Aspergillus?niger?DSMZ?821)；所述產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖1～3g/L，微晶纖維素2～3g/L，蛋白胨1～2gL，（NH₄）₂SO₄2～3gL，KH₂PO₄3～4gL，尿素0.4～0.6g/L，CaCl₂·2H₂O?0.6～1.0gL,MgSO₄·7H₂O?0.4～0.8gL，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.7～1.1×10^-2g/L,MnSO₄·H₂O?2.6～4.8×10^-3gL,ZnSO₄·H₂O?2.6～4.0×10^-3gL,CoCl2·6H₂O?5.0～8.0×10^-3g/L，吐溫800.3～0.5g/L，其余為水，pH?5.0。每100mL種子液中加入桑葉0.2-1.0g。所述種子液的pH為5.0～7.0，培養(yǎng)溫度為28～35℃，振蕩速度為150～180r/min，培養(yǎng)時(shí)間為6～24h。