[發明專利]恩拉霉素標準品的高壓液相制備方法

有效

• 申請號: 201210159394.6
• 申請日: 2012-05-22
• 公開（公告）號: CN102675427A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 崔厚華;冷董碧;殷曉浦;黃苓;劉雅晶
• 申請（專利權）人: 江西興鼎科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/16;G01N33/68
• 代理公司: 江西省專利事務所 36100
• 代理人: 黃新平

1.一種恩拉霉素標準品的高壓液相制備方法，其特征在于：它包括以下步驟：

（1）、發酵菌體試樣溶液制備：

將發酵菌體用去離子水清洗后，按30-90ml/g的比例懸浮在由丙酮：鹽酸溶液：水=20：1：21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，用超聲破碎儀或者超聲機進行細胞破碎10min，得到的混合物在20℃，180rpm的條件下振蕩提取90?min，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的轉速下離心10min，收集上清液，用0.45μm濾膜過濾作為試樣溶液備用，試樣溶液濃度不超過2000μg/ml；

動物飼料試樣溶液制備：?

按GB/T?14699.1的規定選取動物飼料樣品200g-500g，用四分法縮至100g，粉碎通過0.45mm孔徑篩，混勻，貯存于磨口瓶中備用，取上述動物飼料樣品5-10g，加入到80ml的由丙酮：鹽酸溶液：水=20：1：21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，在20℃，180rpm的條件下振蕩提取90min，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的轉速下離心10min，收集上清液，用0.45μm濾膜過濾作為試樣溶液備用，試樣溶液濃度不超過2000μg/ml；

（2）、恩拉霉素標準品制備：按下列條件進行反相高壓液相色譜：?

試樣溶液濃度：不超過2000μg/ml；?

進樣量：100μl；

色譜柱：?C18柱半制備型，長250mm，內徑10mm，粒度5μm；

流動相：B：色譜純乙腈,?A：0.2%乙酸，制法是，吸取2ml色譜純乙酸，溶于1000ml純凈水中；?

流速：2.0ml/min；?

柱溫：30℃；?

檢測波長：267nm；?

根據組分A和組分B的保留時間進行收集；

將收集的組分A峰和組分B峰分別按常規的旋轉蒸發工藝除去溶劑，即得恩拉霉素組分標準品；

所述的發酵菌體是指發酵液中恩拉霉素產生菌的菌絲體；

所述的動物飼料是指動物配合飼料、濃縮飼料、預混合飼料或恩拉霉素預混劑。