[發明專利]一種篩查ALK融合基因的方法無效
| 申請號： | 201210158412.9 | 申請日： | 2012-05-18 |
| 公開（公告）號： | CN102888452A | 公開（公告）日： | 2013-01-23 |
| 發明（設計）人： | 陳海泉;孫藝華;王瑞;潘云建;胡海川;李晨光;王磊;葉挺;羅曉陽;李航;張揚 | 申請（專利權）人： | 復旦大學附屬腫瘤醫院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吳桂琴 |
| 地址： | 20003*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 alk 融合 基因 方法 | ||
1.一種篩查ALK融合基因的方法，其特征在于，其包括如下步驟：
(1)設計篩查ALK融合基因的7對real-time?PCR聯合引物或探針；
(2)提取樣本中的總RNA；
(3)以樣本中的總RNA為模板，通過逆轉錄方法合成cDNA；
(4)在7個real-time?PCR反應單位中，以(3)中所得的cDNA為模板，分別加入(1)中設計的7對引物，以及包括熒光染料在內的反應預混液；
(5)在real-time?PCR反應儀上進行real-time?PCR反應，并分別記錄每個樣本的7個反應單位的熒光閾值Ct值；
(6)分別計算引物I～IV所在反應體系的Ct值的均值CtABP，和引物V～VII所在反應體系的CT值的均值CtBBP；
(7)計算2-ΔCT，判定樣本中是否具有ALK融合基因。
2.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聯合引物對或探針的核苷酸編碼序列如SEQ?ID?NO?1-14所示。
3.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(7)中，結果的判定標準為：
相對表達量值2-ΔCT，其中-ΔCT＝-(CtABP-CtBBP)；
有ALK融合基因：2-ΔCT≥12；
無ALK融合基因：2-ΔCT＜12。
4.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的ALK融合基因是非小細胞肺癌相關的ALK融合基因。
5.SEQ?ID?NO?1-14的real-time?PCR聯合引物對或探針在制備篩查ALK融合基因突變的制劑中的用途。
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