[發明專利]一種金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210157894.6
• 申請日: 2012-05-21
• 公開（公告）號: CN102676490A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 張輝;王冉;包紅朵
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A23B4/22;A23B5/16;A23B9/28;A23B7/155;A23C9/12;A23L3/3571;A61K38/51;A6
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 程化銘

1.一種金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶，其特征在于其氨基酸序列為Seq?ID?NO.2。

2.一種金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶的編碼基因，其特征在于其核苷酸序列為Seq?ID?NO.1。

3.一種含有權利要求2所述的一種金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶的編碼基因的質粒。

4.一種含有權利要求3所述的質粒的重組菌。

5.一種表達李斯特菌噬菌體溶壁酶的制備方法，其特征在于步驟1）中采用引物5’-?ATT?GGA?TCC?GGT?AGG?TGT?TGA?CCA?ATG?TTG?-3’和引物5’-?CTT?AAG?CTTTAA?ATC?GTG?CTA?AAC?TTA?CC?-3’從金黃色葡萄球菌噬菌體基因組DNA中擴增金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶基因；

具體步驟如下

從金黃色葡萄球菌噬菌體基因組中擴增金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶基因；

構建表達金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶的重組表達載體；

將重組表達載體轉化大腸桿菌感受態細胞，篩選得到表達金黃色葡萄球噬菌體溶壁酶的工程菌；

異丙基1-1硫代-β呋喃半乳糖苷誘導表達，獲得重組基因表達產物；

將重組基因表達產物，經鎳柱親和層析純化分離，得到重組的金黃色葡萄球噬菌體溶壁酶；

將純化的溶壁酶產物經去毒素試劑盒進行去毒處理即≤0.01?EU/μg內毒素。

6.根據權利要求1所述的一種金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶在制備防治奶牛乳房炎藥物的應用。

7.根據權利要求1所述的一種金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶在制備抑制金黃色葡萄球菌污染或過度生長藥物的應用。

8.根據權利要求7所述的一種金黃色葡萄球菌噬菌體溶壁酶在制備抑制金黃色葡萄球污染或過度生長藥物應用，其特征在于所述的食品為由肉類，或蛋類，或奶制品，或糧食，或蔬菜，或它們之間的組合加工的固體或液體類食品。