[發(fā)明專利]燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的蛋白質(zhì)指紋圖譜模型及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210157862.6 | 申請日： | 2012-05-21 |
| 公開（公告）號： | CN103424463A | 公開（公告）日： | 2013-12-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馮建軍;章桂明;李健強(qiáng);鄭耘;李一農(nóng);婁定風(fēng) | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局動植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心 |
| 主分類號： | G01N27/64 | 分類號： | G01N27/64 |
| 代理公司： | 深圳鼎合誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44281 | 代理人： | 羅瑤 |
| 地址： | 518045 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 燕麥 噬酸菌 西瓜 蛋白質(zhì) 指紋 圖譜 模型 及其 應(yīng)用 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及微生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的蛋白質(zhì)指紋圖譜模型，及該模型在燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N檢測和鑒定中的應(yīng)用。?
背景技術(shù)
西瓜細(xì)菌性果斑病是一種嚴(yán)重危害葫蘆科作物的世界性病害，尤其對西瓜和甜瓜危害嚴(yán)重。該病病原菌最早由Schaad等命名為類產(chǎn)堿假單胞菌西瓜亞種（Pseudomonas?pseudoalcaligens?subsp.citrulli）。1992年，Willems等根據(jù)rRNA-RNA和DNA-DNA分子雜交結(jié)果，將其改名為燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N（Acidovorax?avenae?subsp.citrulli，簡稱Aac.）。目前，該病害每年在美國東南部的10多個州都有發(fā)生，雖然有的年份發(fā)生面積不到5%，但是罹病田的損失可高達(dá)90%~100%。由于該病菌可以通過種子傳帶，已對美國西瓜制種業(yè)和種植業(yè)造成巨大沖擊和威脅。此外，該病先后還在土耳其、澳大利亞、日本、泰國等國家造成危害。1986年以來，我國相繼記載和報(bào)道了該病在新疆、海南等省的西瓜、甜瓜制種基地和大田生產(chǎn)中發(fā)生的危害。?
基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜檢測(Matrix-assisted?laser?desorption?ionization?time?of?flight?mass?spectrometry,MALDI?TOF?MS)中，樣品的蛋白分子在飛行管內(nèi)的飛行速度與m/z-1/2成正比，不同m/z值的蛋白分子到達(dá)檢測器的時間不同，從而得到具有不同m/z值的圖譜，實(shí)現(xiàn)對樣品的鑒定。目前尚未有用于檢測或鑒定的燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的蛋白質(zhì)指紋圖譜模型，也沒有基于該蛋白質(zhì)指紋圖譜模型的檢測方法。?
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有特異性識別燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的蛋白質(zhì)指紋圖譜模型及該模型的蛋白質(zhì)檢測分析數(shù)據(jù)庫，以及該模型或分析系統(tǒng)在燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的檢測和鑒定中的應(yīng)用。?
本發(fā)明的另一目的是提供一種燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜檢測方法。?
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：?
本發(fā)明公開了一種燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的蛋白質(zhì)指紋圖譜模型，該模型根據(jù)多個蛋白質(zhì)的質(zhì)荷比及其蛋白質(zhì)波峰強(qiáng)度系數(shù)繪制而成，其中蛋白質(zhì)的質(zhì)荷?比（m/z值）分別為3171.4、3735.0、4963.5、5139.0、5866.4、6554.1、7466.1、7948.0、8384.5、9304.2、9504.3、9920.0、10272.8、10840.7、12530.5、12896.5。需要說明的是，上述質(zhì)荷比的值是一組相對穩(wěn)定的值，但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在不同實(shí)驗(yàn)條件下，在這些數(shù)值的基礎(chǔ)上進(jìn)行的小數(shù)點(diǎn)值的變化，或者說在1‰誤差范圍內(nèi)個別值進(jìn)行的數(shù)值變化，也屬于本申請的保護(hù)范圍。?
進(jìn)一步地，蛋白質(zhì)的質(zhì)荷比及蛋白質(zhì)波峰強(qiáng)度系數(shù)由基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀的軟件統(tǒng)計(jì)分析得到。?
本發(fā)明還公開了一種包括上述蛋白質(zhì)指紋圖譜模型的蛋白質(zhì)檢測分析數(shù)據(jù)庫。?
本發(fā)明還公開了上述蛋白質(zhì)指紋圖譜模型或蛋白質(zhì)檢測分析系統(tǒng)在燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的檢測或鑒定中的應(yīng)用。?
本發(fā)明還公開了一種燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N的基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜檢測方法，包括樣品蛋白質(zhì)芯片制備、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀檢測，以及樣品蛋白質(zhì)圖譜比對；其中，樣品蛋白質(zhì)圖譜比對是將基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀檢測分析獲得的樣品蛋白質(zhì)圖譜，與上述的蛋白質(zhì)指紋圖譜模型比較；或者在上述的蛋白質(zhì)檢測分析數(shù)據(jù)庫中比對。?
本發(fā)明實(shí)施方式的檢測方法中，樣品蛋白質(zhì)芯片制備包括釋放樣品蛋白質(zhì)的前處理和點(diǎn)樣，點(diǎn)樣的步驟包括，先在質(zhì)譜靶芯片上滴加樣品上清液，晾干后再滴加基質(zhì)溶液。?
進(jìn)一步地，檢測方法中，基質(zhì)溶液的溶劑乙腈：甲醇：無菌去離子水按體積比1：0.8-1.2：0.8-1.2混合而成。?
進(jìn)一步地，檢測方法中，基質(zhì)溶液的溶質(zhì)為α-氰基-4-羥基肉桂酸。?
本發(fā)明實(shí)施方式的檢測方法中，釋放樣品蛋白質(zhì)的前處理采用的溶劑包括第一溶劑、第二溶劑和第三溶劑中的至少一種；第一溶劑為0.1%的三氟乙酸；第二溶劑為70%的甲酸；第三溶劑為100%乙腈。?
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