[發(fā)明專利]蛋白質(zhì)在水溶液中的穩(wěn)定性

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210157195.1
• 申請(qǐng)日: 2003-10-08
• 公開（公告）號(hào): CN102716477A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M·肯托尼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諾華疫苗和診斷有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): A61K39/295
• 分類號(hào): A61K39/295;A61K47/02;A61P31/20;A61P31/04
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 范征

本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00310101562.7、申請(qǐng)日為2003年10月8日、發(fā)明名稱為“蛋白質(zhì)在水溶液中的穩(wěn)定性”的中國專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明與蛋白質(zhì)在水溶液中的穩(wěn)定性有關(guān)。

背景技術(shù)

在單一小瓶內(nèi)混合懸浮抗原的做法很具吸引力[1，2，3]，但由于不同成分混合后產(chǎn)生相互作用而導(dǎo)致問題，液體制劑尤其如此[4]。出現(xiàn)的問題包括抗原干擾、抗原競爭、抗原降解、抗原決定部位抑制和輔劑兼容性?；旌蟿┑馁|(zhì)量控制也比較困難。

不過，混合抗原并不一定有害。例如在產(chǎn)生免疫制劑中混合白喉、破傷風(fēng)和百日咳(英文簡稱DTP)的抗原(使用整細(xì)胞(Pw)或無細(xì)胞(Pa)百日咳抗原)的做法已行之多年，實(shí)際上，在DTP進(jìn)一步加入結(jié)合B型流感嗜血桿菌(H.influenzae)(Hib)囊狀多糖能加強(qiáng)對(duì)Hib成分產(chǎn)生的抗體反應(yīng)。[5]?；旌峡乖瓉眍A(yù)防麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹(英文簡稱MMR)也是常見的。

不過，產(chǎn)生免疫的藥品，例如DTP、Hib，滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒(IPV)B型肝炎病毒(HBV)等都有效能測驗(yàn)問題的報(bào)告[6]。曾有報(bào)告指出關(guān)于選擇混合A型和B型肝炎病毒抗原[7]和Hib混合劑[8，9]的免疫助劑問題。例如，氫氧化鋁是DTP抗原常用的免疫助劑，但Hib囊狀多糖抗原在液體制劑中會(huì)被此鹽水解[6，10]。

已知一種五價(jià)Hib+DTPw+HBV液體免疫配方的HBV成分的免疫反應(yīng)由于混合制造而降低[11，12]，導(dǎo)致這一情況的可能原因是Hib和DTP成分協(xié)同抑制抗-HBV反應(yīng)。反之，未有報(bào)告指出一種混合Hib+DTPa+polio+HBV的六價(jià)液體制劑配方的免疫性受不良的影響[13]。這種六價(jià)產(chǎn)品HEXAVACTM在歐洲已獲核準(zhǔn)在人體使用。

本發(fā)明的目標(biāo)是改善(例如穩(wěn)定性)液體混合疫苗和制造。尤其是改進(jìn)包括HBV抗原在內(nèi)的混合產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供制造抗原混合物的工序，步驟如下：(a)在酸性環(huán)境下使用磷化鋁液混合B型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)；(b)以任何順序加入白喉抗原、破傷風(fēng)抗原和百日咳抗原至液體內(nèi)；并(c)加入Hib-結(jié)合抗原至液體內(nèi)。

當(dāng)吸附至磷化鋁免疫助劑時(shí)，HBsAg的免疫性最佳，但當(dāng)吸附至氫氧化鋁或磷化鋁時(shí)，Hib結(jié)合物會(huì)水解。本發(fā)明的工序的優(yōu)點(diǎn)是制造一種HBsAg被吸附至磷化鋁，而Hib-結(jié)合物卻不為磷化鋁所吸附的液體制劑。本工序提供高HBsAg吸附能力和整體穩(wěn)定性。

此外，本發(fā)明更提供一種包含磷化鋁、HbsAg、白喉抗原、破傷風(fēng)抗原、百日咳抗原和Hib-結(jié)合抗原，其中HBsAg被吸附至磷化鋁免疫助劑而Hib-結(jié)合抗原卻不為鋁免疫助劑所吸附。

混合抗原的順序

工序步驟(a)至(c)應(yīng)以特定的順序進(jìn)行，即HBsAg比DTP抗原先加入磷化鋁液內(nèi)，Hib-結(jié)合物則在加入DTP抗原后才加入。

在步驟(b)，比較好的順序是先加白喉抗原，然后加破傷風(fēng)和百日咳抗原，但不一定要這樣做。這樣可支持白喉抗原吸附至鋁免疫助劑。

破傷風(fēng)和百日咳抗原可在步驟(b)內(nèi)以任何順序加入。

加入每一種抗原后，最好混合(例如攪拌)液體至少10分鐘(例如約30分鐘)。

pH和溫度

本發(fā)明工序的步驟(a)中，磷化鋁和HBsAg是在液狀中混合。這一步驟使HBsAg吸附至磷化鋁免疫助劑?；旌蠒r(shí)，如果pH過低，HBsAg會(huì)變性。如果pH太高，HBsAg將不會(huì)吸附至磷化鋁。

加入每一種抗原后，工序可能涉及調(diào)整pH的步驟。在步驟(a)加入HBsAg后，如必要，可調(diào)整pH至原來或與原來相似的pH。在步驟(b)加入個(gè)別的DTP后，可調(diào)整pH。步驟(b)后，并在步驟(c)加入Hib-結(jié)合抗原前，最好先調(diào)整pH大約至中性。

在步驟(c)加入Hib-結(jié)合抗原后，最好調(diào)整pH以便更適合病人使用。pH最好在7.0以下以預(yù)防白喉類毒素轉(zhuǎn)化成有毒狀態(tài)。因此，pH最好保持在6.2和6.9之間。

本發(fā)明的工序最好在15℃和30℃之間進(jìn)行(例如在19℃和27℃，或在23±4℃)。

磷化鋁

本發(fā)明的工序基礎(chǔ)是在液狀混合抗原和磷化鋁。一般都稱這樣的液狀磷化鋁為“溶液”，但從嚴(yán)格的物理化學(xué)角度來說，此鹽在水中不溶化，并形成懸浮液。

磷化鋁最好使用液狀，以便加入HbsAg，并隨后加入其它抗原。加入抗原混合物前，最好先稀釋磷化鋁至要求的濃度，確保有一個(gè)均勻的溶液。