[發明專利]一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導和繼代培養的方法及其所用的培養基

有效

• 申請號: 201210156881.7
• 申請日: 2012-05-21
• 公開（公告）號: CN102640710A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 宋麗莉;趙華強;姜育龍;侯梅芳;張妤萍
• 申請（專利權）人: 上海應用技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根

技術領域

本發明涉及一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導和繼代培養的方法及所用的培養基。

背景技術

紫杉醇(Taxo1)是從紅豆杉科紅豆杉屬（Taxus?spp.）植物的樹皮中提取的一種天然抗癌紫杉烷類化合物，是目前世界公認的最好的廣譜、強活性天然抗癌藥。由于紅豆杉屬植物生長緩慢，紫杉醇含量較低，僅占樹皮干質量的0.01%?-?0.02%，枝葉干質量的十萬分之一左右。因此隨著全球對野生紅豆杉資源保護措施的不斷加強，利用野生資源生產紫杉醇已無可能，而現階段人工種植的紅豆杉資源量還遠遠不能滿足紫杉醇生產的需求量。?

運用植物細胞培養技術對紅豆杉愈傷組織進行大規模培養，獲取人們需要的活性產物可望成為紫杉醇生產的重要途徑。?

發明內容

本發明的目的之一為了解決上述的運用植物細胞培養技術對紅豆杉愈傷組織進行大規模培養，獲取人們需要的活性產物紫杉醇的問題而提供了一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導和繼代培養的方法。?

本發明的目的之二是提供上述的一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導和繼代培養的方法所用的誘導培養基和繼代培養基。?

本發明的技術方案?

一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導和繼代培養的方法，即以南方紅豆杉的葉片為外植體，先后分別在誘導培養基和繼代培養基中進行愈傷組織的誘導和繼代培養后，最終得到紅豆杉葉片愈傷組織。

上述的一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導和繼代培養的方法，具體包括如下步驟：?

（1）、外植體的消毒

取當年生南方紅豆杉的幼嫩葉片，經流水沖洗，然后依次用酒精、氯化汞消毒,?蒸餾水洗凈后獲得消毒的紅豆杉外植體；

（2）、愈傷組織誘導培養

將步驟（1）所得的消毒的紅豆杉外植體接種于誘導培養基上，控制溫度為20-22℃條件下暗培養，20天后得到誘導培養后的愈傷組織；

所述的誘導培養基，按每升計算，

由400mg?NH₄N0₃、556mg?Ca(NO₃)₂.4H₂O、990?mg?K₂SO₄、96?mg?CaCl₂.2H₂O、170?mg?KH₂PO₄、0.25?mg?Na₂MoO₄.2H₂O、370?mg?MgSO₄.7H₂O、22.4mg?MnSO₄.H₂O、8.6mg?ZnSO₄.7H₂O、0.25mg?CuSO₄.5H₂O、27.8?mg?FeSO₄.7H₂O、37.3?mg?Na₂-EDTA、100?mg肌醇、1.0mg維生素B1、0.5?mg煙酸、0.5?mg維生素B6、2.0?mg甘氨酸、1mg?吲哚乙酸（IBA）、0.25mg?6-芐基嘌呤（6-BA）、0.5mg?水解酪蛋白（CH）、20?g蔗糖、?8g瓊脂、2g活性炭和余量的水組成；