[發(fā)明專利]一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)的方法及其所用的培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210156881.7
• 申請日: 2012-05-21
• 公開（公告）號: CN102640710A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋麗莉;趙華強;姜育龍;侯梅芳;張妤萍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海應(yīng)用技術(shù)學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根

1.一種紅豆杉葉片愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于具體包括如下步驟：

（1）、外植體的消毒

取當年生南方紅豆杉的幼嫩葉片，經(jīng)流水沖洗，然后依次用酒精、氯化汞消毒,?蒸餾水洗凈后獲得消毒的紅豆杉外植體；

（2）、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)

將步驟（1）所得的消毒的紅豆杉外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制溫度為20-22℃條件下暗培養(yǎng)，20天后得到誘導(dǎo)培養(yǎng)后的愈傷組織；

所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按每升計算，

由400mg?NH₄N0₃、556mg?Ca(NO₃)₂.4H₂O、990?mg?K₂SO₄、96?mg?CaCl₂.2H₂O、170?mg?KH₂PO₄、0.25?mg?Na₂MoO₄.2H₂O、370?mg?MgSO₄.7H₂O、22.4mg?MnSO₄.H₂O、8.6mg?ZnSO₄.7H₂O、0.25mg?CuSO₄.5H₂O、27.8?mg?FeSO₄.7H₂O、37.3?mg?Na₂-EDTA、100?mg肌醇、1.0mg維生素B1、0.5?mg煙酸、0.5?mg維生素B6、2.0?mg甘氨酸、1mg?IBA、0.25mg?6-BA、0.5mg?CH?、20?g蔗糖、?8g瓊脂、2g活性炭和余量的水組成；

或由400mg?NH₄N0₃、556mg?Ca(NO₃)₂.4H₂O、990?mg?K₂SO₄、96?mg?CaCl₂.2H₂O、170?mg?KH₂PO₄、0.25?mg?Na₂MoO₄.2H₂O、370?mg?MgSO₄.7H₂O、22.4mg?MnSO₄.H₂O、8.6mg?ZnSO₄.7H₂O、0.25mg?CuSO₄.5H₂O、27.8?mg?FeSO₄.7H₂O、37.3?mg?Na₂-EDTA、100?mg肌醇、1.0mg維生素B1、0.5?mg煙酸、0.5?mg維生素B6、2.0?mg甘氨酸、2mg??IBA、0.5mg?CH?、20?g蔗糖、8g瓊脂、2g活性炭和余量的水組成；

或由1650mg?NH₄NO₃、1900mg?KNO₃、440mg?CaCl₂·2H₂O、370mg?MgSO₄·7H₂O、170mg?KH₂PO₄、0.83mg?KI、6.2?mgH₃BO₃、22.3mg、MnSO₄·4H₂O、8.6mg?ZnSO₄·7H₂O、0.25mg?Na₂MnO₄·2H₂O、0.025mg?CuSO₄·5H₂O、0.025mg?CoCl₂·6H₂O、27.8mg?FeSO₄·7H₂O、?37.3mg?Na₂-EDTA·2H₂O、100?mg肌醇、1.0mg維生素B1、0.5?mg煙酸、0.5?mg維生素B6、2.0?mg甘氨酸、2mg?IBA?、0.5mg?CH?、20?g蔗糖、?8g瓊脂、2g活性炭和余量的水組成；?

（3）、愈傷組織繼代培養(yǎng)

將步驟（2）所得的初代愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基上，在20-22℃條件下暗培養(yǎng)，20天后得到繼代培養(yǎng)后的愈傷組織；

所述的繼代培養(yǎng)基，按每升計算，

由400mg?NH₄N0₃、556mg?Ca(NO₃)₂.4H₂O、990?mg?K₂SO₄、96?mg?CaCl₂.2H₂O、170?mg?KH₂PO₄、0.25?mg?Na₂MoO₄.2H₂O、370?mg?MgSO₄.7H₂O、22.4mg?MnSO₄.H₂O、8.6mg?ZnSO₄.7H₂O、0.25mg?CuSO₄.5H₂O、27.8?mg?FeSO₄.7H₂O、37.3?mg?Na₂-EDTA、100?mg肌醇、1.0mg維生素B1、0.5?mg煙酸、0.5?mg維生素B6、2.0?mg甘氨酸、2?mg?2,4-D?、1?mg?6-BA?、20?g蔗糖、8g瓊脂、2g活性炭和余量的水組成；

或由400mg?NH₄N0₃、556mg?Ca(NO₃)₂.4H₂O、990?mg?K₂SO₄、96?mg?CaCl₂.2H₂O、170?mg?KH₂PO₄、0.25?mg?Na₂MoO₄.2H₂O、370?mg?MgSO₄.7H₂O、22.4mg?MnSO₄.H₂O、8.6mg?ZnSO₄.7H₂O、0.25mg?CuSO₄.5H₂O、27.8?mg?FeSO₄.7H₂O、37.3?mg?Na₂-EDTA、100?mg肌醇、1.0mg維生素B1、0.5?mg煙酸、0.5?mg維生素B6、2.0?mg甘氨酸、2mg?2,4-D?、0.5mg?CH?、20?g蔗糖、8g瓊脂、2g活性炭和余量的水組成；

或由1650mg?NH₄NO₃、1900mg?KNO₃、440mg?CaCl₂·2H₂O、370mg?MgSO₄·7H₂O、170mg?KH₂PO₄、0.83mg?KI、6.2?mgH₃BO₃、22.3mg、MnSO₄·4H₂O、8.6mg?ZnSO₄·7H₂O、0.25mg?Na₂MnO₄·2H₂O、0.025mg?CuSO₄·5H₂O、0.025mg?CoCl₂·6H₂O、27.8mg?FeSO₄·7H₂O、?37.3mg?Na₂-EDTA·2H₂O、100?mg肌醇、1.0mg維生素B1、0.5?mg煙酸、0.5?mg維生素B6、2.0?mg甘氨酸、2?mg?2,4-D?、1?mg?6-BA?、20?g蔗糖、8g瓊脂、2g活性炭和余量的水組成。