[發明專利]一種抗多氯聯苯多克隆抗體的制備方法

無效

• 申請號: 201210153561.6
• 申請日: 2012-05-15
• 公開（公告）號: CN102653560A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: 莊惠生;陳寒玉
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C07K14/765;C07K1/113
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 林君如

技術領域

本發明涉及一種抗體的制備方法，特別涉及一種水體和土壤沉積物中環境激素多氯聯苯的免疫檢測的抗體的制備方法。

背景技術

多氯聯苯(PCBs)作為一種具有持久性危害的痕量有機污染物，得到了世界性的廣泛關注。據估計，全世界已生產和應用的多氯聯苯近100萬t，其在各類環境中的累積量估計達25萬-30萬t。PCBs具有較低的水溶解性和高的辛醇-水體系分配系數，因此很容易就進入生態循環，通過食物鏈的被富集，對人類產生毒害作用。同時由于其化學降解過程和生物降解過程相當緩慢，使得此類物質對環境造成長期的污染，以致多次出現二次污染。

多氯聯苯(PCBs)作為一種受到世界各國環境工作者廣泛關注的環境激素類污染物，其檢測方法的研究成為一個研究熱點。當前，以酶聯免疫法(ELISA)為代表的免疫檢測方法作為一種快速，特異性強、靈敏度高、簡便、快速等優點，近年來備受人們的關注。國外的研究機構已經成功的合成出了多種多氯聯苯類污染物的多克隆和單克隆抗體。并應用于多種多氯聯苯類污染物的免疫檢測方法中。美國國家環保局(EPA)也已經在2003年就把此類方法作為標準方法公布出來，應用于土壤沉積物中多氯聯苯的檢測。當前市場上已經有多氯聯苯免疫檢測試劑盒的產品。

但是經過研究發現，當前市場上銷售的多氯聯苯試劑盒，以及文獻報道的多氯聯苯的多克隆抗體或者單克隆抗體，其制備方法具有很大的差異性。這是由于多氯聯苯在理論上有209種同系物，氯原子的個數和位置的不同，使得其在環境中的毒性，降解以及生理活性都有很大不同，因此，目前對于多氯聯苯的免疫檢測研究所用的抗體，根據各個研究機關的研究目的不同，其制備抗體所需要的多氯聯苯單體免疫原有很大的不同，從而使制備出的抗體對環境中的多氯聯苯的免疫特異性也有很大的差別。Jane?C.Chuang采用6-[(2，2’，4′，5′-四氯-4-苯基)-己酸做半抗原制備免疫原得到了一種多克隆抗體，用4-(2，4，5-三氯苯氧基)-丁酸與牛血清蛋白的偶聯物做包被原，用來測定環境中的多氯聯苯總量。這個方法也是美國EPA標準的方法。Tomoaki?Tsutsumi采用做免疫原，得到了一種可以測定環境中具有共平面結構多氯聯苯單體的單克隆抗體，測定了魚肉中的PCB118.Thomas?R.Glass等用3，3’，4’-三氯聯苯-4-苯基己酸，3，3’，4’，5’-四氯聯苯-4-苯基己酸，3，3’，4’，5，5’-氯聯苯-4-苯基己酸等三種多氯聯苯單體的半抗原衍生物，制備了三種測定公平面多氯聯苯PCB77，126，169的單克隆抗體。這個制備技術已獲得日本的發明專利。其他的像Milan?Fránek采用PCB77，126的半抗原衍生物制備出抗共平面多氯聯苯單體PCB77，126，169的多克隆抗體，Ya-Wen?Chiu等采用PCB35，52，77，126等單體的半抗原衍生物制備出的免疫原，然后制備出相應的單克隆抗體，用來建立ELISA法測定環境樣品中的共平面多氯聯苯。綜合這些研究發現，當前制備出的多氯聯苯抗體，不論是多克隆還是單克隆抗體，均是采用一種多氯聯苯單體的半抗原衍生物制成相應的免疫原，對動物進行免疫得到的。由于使用的免疫原的不同，得到的抗體的特異性也有很大差別。

在對環境中多氯聯苯的檢測研究中，對樣品中多氯聯苯類污染物的總量測定和單個有代表性的毒性較強的單體的檢測具有同樣重要的意義。而由于不同抗原得到的抗體對相應免疫原特異性的差別，建立了不同的免疫檢測方法。

在對多氯聯苯總量測定的研究過程中，對抗體的需求特點是其對多氯聯苯同系物的親和性越高越好，這樣測定的數據才會更準確的反應環境中多氯聯苯的污染狀況。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種抗多氯聯苯多克隆抗體的制備方法，提高抗體對多氯聯苯單體的親和性，為滿足多氯聯苯類污染物的免疫檢測技術發展的需要提供技術支持。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種抗多氯聯苯多克隆抗體的制備方法，該方法首先通過半抗原合成免疫原，然后采用動物免疫方法制備得到抗多氯聯苯多克隆抗體。

所述的通過半抗原合成免疫原具體包括以下步驟：

(1)稱取半抗原置于潔凈干燥的小錐形瓶中，加入DMF使其溶解，控制半抗原的濃度為0.1mmol/100μL?DMF；