[發明專利]診斷試劑盒及CCDC49在制備胃癌早期診斷試劑中的應用

有效

• 申請號: 201210152714.5
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN102680709A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 楊麗娜;陶生策;劉炳亞;王靖方;郭書娟;朱正綱;李建芳;燕敏
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種診斷試劑盒，用于胃癌早期的診斷，其特征在于，所述診斷試劑盒包括酶標板、人蛋白質CCDC49、標準血清、酶標試劑、酶底物溶液、封閉液、樣品稀釋液、洗滌液和終止液，其中，人蛋白質CCDC49包被于所述酶標板上。

2.如權利要求1所述的一種診斷試劑盒，其特征在于，所述人蛋白質CCDC49是從釀酒酵母中過量表達，親和純化而得到，濃度為50μg/mL。

3.如權利要求1所述的一種診斷試劑盒，其特征在于，所述標準血清包括0U/mL標準血清1和100U/mL標準血清2，所述0U/mL標準血清1為健康人血清稀釋于樣品稀釋液中；所述100U/mL標準血清2為CCDC49抗體為陽性的血清稀釋于樣品稀釋液中。

4.如權利要求1所述的一種診斷試劑盒，其特征在于，所述酶標試劑含HRP-二抗0.1-1μg/mL。

5.如權利要求1所述的一種診斷試劑盒，其特征在于，所述酶底物溶液為TMB溶液，所述TMB溶液包括顯色劑A和顯色劑B，顯色劑A：500mL溶液中含有醋酸鈉13.6g、檸檬酸1.6g和30%雙氧水0.3mL；顯色劑B：500mL溶液中含有TMB?350mg、DMSO?20mL和檸檬酸·H₂O?5.1g。

6.如權利要求1所述的一種診斷試劑盒，其特征在于，所述封閉液為0.5%BSA的0.01mol/L?pH?7.4磷酸鹽-NaCl緩沖液（PBS）溶液，即1升溶液中含5g?BSA（牛血清白蛋白）、8g?NaCl、0.2g?KH₂PO₄、2.9g?Na₂HPO₄·12H₂O和0.2g?KCl。

7.如權利要求1所述的一種診斷試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液為0.01mol/L?pH?7.4磷酸鹽-NaCl緩沖液（PBS）；所述洗滌液為0.01mol/L?pH7.4磷酸鹽-NaCl緩沖液(PBST)，PBST內含0.05%Tween-20，即1升溶液中含8g?NaCl、0.2g?KH₂PO₄、2.9g?Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g?KCl和0.5mL?Tween-20；所述終止液為2mol/L?H₂SO₄溶液。

8.如權利要求1所述的一種診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中的試劑均可加入防腐劑。

9.一種診斷試劑盒，用于胃癌早期的診斷，其特征在于，所述診斷試劑盒采用的是現在臨床廣泛使用的ELISA技術，應用間接法定性檢測人血清中抗蛋白質CCDC49的IgM抗體，具體是：用人蛋白質CCDC49抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中加入待測血清，再與HRP標記的二抗結合，形成CCDC49-抗體-酶標二抗復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色，TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色，顏色的深淺和樣品中的抗蛋白質CCDC49的IgM抗體的水平呈正相關。

10.人蛋白質CCDC49在制備胃癌早期診斷試劑中的應用。