[發明專利]一種構建組織工程血管的方法有效

申請號：	201210150543.2	申請日：	2012-05-16
公開（公告）號：	CN102697581A	公開（公告）日：	2012-10-03
發明（設計）人：	付煒;薛繼鑫;何曉敏;殷猛;鄭景浩;王偉;徐志偉	申請（專利權）人：	上海交通大學醫學院附屬上海兒童醫學中心
主分類號：	A61F2/06	分類號：	A61F2/06;A61L27/36
代理公司：	上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262	代理人：	巫蓓麗
地址：	200127 上***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種構建組織工程血管方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及組織工程技術領域，具體地說，是一種血管脫細胞基質膜片的制備方法，及基于該方法的構建組織工程血管的方法。

背景技術

血管疾病是我國目前死亡率最高疾病之一，血管移植是其主要的外科治療手段。血管移植手術中需要利用組織工程血管來替代病患血管。組織工程血管是利用組織工程學方法，用血管種子細胞（內皮細胞、平滑肌細胞）與相關細胞外基質（支架材料）復合，以構建從形態到功能都接近活體血管的組織工程化血管。

血管組織支架是活細胞在體外生長所需的支持物，提供一個供種子細胞生長的三維空間，便于細胞黏著、生長和新陳代謝。支架材料除了應具有良好的生物相容性、血液相容性、無免疫原性和一定的可塑性、抗張強度和彈性，還應有適合細胞遷移和增殖的多孔結構、與細胞長入和基質分泌相當的生物降解速度、有利于細胞貼附和增殖的表面化學特性。

目前常用的支架材料有天然材料、人工合成材料和復合材料。應用于組織工程血管研究的天然材料包括甲殼素、葡聚糖明膠、膠原蛋白、彈性蛋白、多聚氨基酸、多肽、透明質酸及其復合物、某些組織的脫細胞基質等。天然材料支架本身包含許多生物信息，能夠提供細胞所需的信號，且與細胞親和性強，能為細胞提供近似體內的發生發育的細胞外基質支架條件，能使細胞聚集成組織，控制組織結構，調節細胞表型，并具有極低的免疫排斥反應和良好的順應性，是構建組織工程血管的良好載體。現在應用較多的脫細胞血管基質材料均富含膠原，保持著膠原纖維、彈性蛋白等結構蛋白的構象和原有的排列分布，力學特性及強度與脫細胞前相似。

中國期刊《中國修復重建外科雜志》，2003年第17卷第2期，刊出的論文“脫細胞基質與血管內皮細胞體外相容性的研究”，公開了一種利用0.1%胰蛋白酶、0.02%乙二胺四乙酸鈉和1.0%?Triton?X-100對豬主動脈作用24小時和176小時進行脫細胞，結果證明酶-化學除垢劑的脫細胞方法幾乎使細胞完全脫落，且基質纖維的三維結構變得疏松，體外空增的異體豬序貫內皮細胞可以種植在脫細胞基質上并且具有伸展和增殖功能。但實際上該方法還存在以下缺陷：（1）采用完整的豬主動脈置入脫細胞溶液中，勢必導致脫細胞溶液與豬主動脈不能充分接觸，脫細胞效率低，進而影響移植后近、遠期的血管通暢率；（2）只能構建特定直徑（與原豬主動脈直徑相同）的脫細胞基質及組織工程血管，仍未解決臨床上常用的小口徑血管移植物來源有限的問題。因此，亟需一種脫細胞化程度高的脫細胞基質的制備方法，及可構建任意口徑組織工程血管的方法，但是目前關于這類方法還未見報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種血管脫細胞基質膜片的制備方法。

本發明的再一的目的是，提供一種構建組織工程血管的方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種血管脫細胞基質膜片的制備方法，所述的方法是沿血管縱軸剪開血管，剔除外膜及刮除內皮層，切成長方形血管塊，沿血管塊所在平面切成長方形薄片，脫細胞后凍干。

所述的血管取自成年豬主動脈弓及升主動脈。

所述的長方形血管塊長15mm，寬10mm。

所述的長方形薄片的厚度是20μm。

所述的脫細胞是采用質量分數1%的SDS溶液脫細胞。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

一種構建組織工程血管的方法，它包括下列步驟：

a）按照如上所述的方法制備血管脫細胞基質膜片；