[發(fā)明專利]一種雜合抗菌肽畢赤酵母工程菌制備方法及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210149859.X
• 申請日: 2012-05-15
• 公開（公告）號: CN103205370A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李本濤;李帥偉
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州格拉姆生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/62;C12N15/81;C07K19/00;A23K1/17;C12R1/84
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1.一種雜合抗菌肽基因轉(zhuǎn)化畢赤酵母工程菌，其特征是一種雜合抗菌肽基因Lfcin?B_Mel轉(zhuǎn)化GS115、KM71和X33等畢赤酵母菌株而制得的工程菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌肽基因轉(zhuǎn)化畢赤酵母工程菌，其特征在于所述的載體是pPICZαA、pPIC3.5K、pPIC9K、pGAPZαA等畢赤酵母表達(dá)載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌肽基因轉(zhuǎn)化畢赤酵母工程菌，其特征在于所述的基因是雜合抗菌肽基因Lfcin?B_Mel，其核苷酸序列如下：TTTAAGTGTAGA?AGA?TGGCAATGGAGAATGAAGAAGTTGGGTGCTCCATCTATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTCGGTTTGCCA?GCT?TTG?ATT?TCT?TGG?ATC?AAG?AGA?AAG?AGACAACAA。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗菌肽基因，其特征在于，經(jīng)酵母偏愛密碼子優(yōu)化的DNA序列為：TTT?AAGTGTAGA?AGA?TGGCAATGGAGAATGAAGAAGTTGGGTGCTCCATCT?

ATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTCGGTTTGCCA?GCT?TTG?ATT?TCT?TGG?ATC?AAG?AGA?AAG?AGACAACAA。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述基因編碼蛋白LFB_Mel，其特征在于，其氨基酸序列為：

FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAFGLPALISWIKRKRQQ。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌肽LFB?Mel制品，其特征在于，制備方法包括如下步驟：

(1)將抗菌肽基因Lfcin?B_Mel經(jīng)酵母偏愛密碼子優(yōu)化后設(shè)計(jì)引物合成基因序列；

(2)將抗菌肽基因Lfcin?B克隆到表達(dá)載體pPICZαA，得到重組表達(dá)載體pPICZαA-Lfcin?B_Mel；

(3)將重組表達(dá)載體pPICZαA-Lfcin?B_Mel電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115；

(4)在pH6.0的YPD培養(yǎng)基中，以終濃度為1％的甲醇，對上述重組酵母基因工程菌誘導(dǎo)表達(dá)5天；

(5)放料，發(fā)酵液經(jīng)80℃以上高溫處理后，噴霧干燥得到轉(zhuǎn)抗菌肽LFB_Mel的制品。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗菌肽LFB_Mel制品，其特征在于所敘述的抗菌肽在養(yǎng)殖中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗菌肽LFB_Mel制品，其特征在于，所述及的應(yīng)用是在制備飼料添加劑，促進(jìn)豬的生長。