[發明專利]新的安絲菌素類化合物及其制備方法

有效

• 申請號: 201210148068.5
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN102731526A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 陳宏;鄭衛;賈緯;陳麗;陳曉明;王傳喜;黃維;楊煌建;謝穎;張祝蘭
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18;C12P17/18;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/01
• 代理公司: 福州市鼓樓區京華專利事務所(普通合伙) 35212
• 代理人: 宋連梅

【技術領域】

本發明涉及一種化合物，尤其涉及一種新的安絲菌素類化合物，本發明還涉及該安絲菌素類化合物的制備方法。

【背景技術】

1972年Kupchan等從原產熱帶非洲的齒葉美登木(M.serrata)中首次分離出天然抗腫瘤活性成分——大環內酯類化合物美登素(Maytansine)，其后研究人員相繼從高等植物矛衛科、鼠李科、大戟科植物、苔蘚類植物中分離到美登木類化合物。最引人注意的是從微生物中發現了這類化合物，1977年，Higashide及其同事在篩選抗癌活性成分的過程中，從分離自莎草科苔屬植物葉子的橙色束絲放線菌(Actinosynnema?pretiosum)中得到六個美登素衍生物，命名為安絲菌素P0、P1、P2、P3、P4、P4’。隨后又從另一個橙色束絲放線菌亞種(A?pretiosum?ssp.Auranticum)中分離得到除上述六個化合物外的十五個新安絲菌素，其母核為19-C的大環內酰胺環，C-3連接不同長度的碳鏈，主要活性成分是P-3。

上述所有這些安絲菌素均可以被還原分解成C-3美登木醇(P-0)，該醇是用于合成含硫醇美登木素生物堿的前體。安絲菌素已被化學轉變成含硫醇的美登木素生物堿(maytansinoids)，該生物堿以細胞結合劑-美登木素生物堿偶聯物的形式體現出的醫療用途已被報道。

隨著對美登素類抗體結合物研究的不斷深入，市場對美登木素類化合物的需求量逐步擴大。由于美登木類植物含美登素及其同系物的含量很低，大量砍伐美登木類植物會對生態造成嚴重破壞，且從野生植物中尋找原料難以滿足工業生產的需要；采用化學合成，又因美登木素結構復雜存在全合成和半合成工藝復雜、過程繁瑣、產率很低、反應專一性差等缺點。

【發明內容】

本發明所要解決的技術問題之一在于提供一種新的安絲菌素類化合物，所述新的安絲菌素類化合物具有抗腫瘤活性。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題之一的：式(I)代表的新的安絲菌素類化合物，

其中，R為CH₂CH₃或CH₂CH(CH₃)₂。

本發明所要解決的技術問題之二在于提供一種新的安絲菌素類化合物的制備方法，通過微生物發酵方法制備安絲菌素類化合物具有工藝簡單、生產成本低的優點。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題之二的：一種所述的新的安絲菌素類化合物的制備方法，其操作步驟如下：

步驟一：制備束絲放線菌菌株FIM06-0063(Actinosynnema?sp)發酵液；所述束絲放線菌菌株FIM06-0063，于2011年12月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC?NO.5677。

步驟二：將步驟一所獲得的束絲放線菌菌株FIM06-0063發酵液進行大孔樹脂吸附柱層析，得到粗提物；

步驟三：將步驟二所獲得的粗提物進行正相硅膠柱層析，并采用氯仿-甲醇梯度洗脫粗提物，然后分段收集各洗脫液；

步驟四：將步驟三所獲得的各洗脫液分別進行薄層層析，并采用高效液相色譜對各洗脫液分別進行檢測分析，然后將薄層層析結果顯橙紅色、且高效液相色譜檢測結果具有相同峰的洗脫液合并，并減壓濃縮該合并后的洗脫液得到第一濃縮物；

步驟五：將步驟四所獲得的第一濃縮物進行中壓反相硅膠柱層析以獲得粗產物，進行中壓反相硅膠柱層析時，先采用體積分數為10％甲醇水溶液為流動相平衡10分鐘后，然后流動相采用體積比10％～100％∶1的甲醇-水溶劑系統梯度洗脫90min，流動相的流速為5ml/min；

步驟六：將步驟五所獲得的粗產物進行Sephadex?LH-20凝膠柱層析，所述Sephadex?LH-20凝膠柱層析采用體積比1∶1的氯仿-甲醇溶劑系統洗脫，并根據流分與碘化鉍鉀顯色反應分段收集各流分，然后將與碘化鉍鉀反應顯色相同的流分合并，減壓濃縮以獲得第二濃縮物；

步驟七：將步驟六所獲得的第二濃縮物采用制備型高效液相色譜進行分離，得到3個組分；最后，將3個組分分別經過制備型硅膠板分離以獲得安絲菌素類化合物；所述制備型高效液相色譜的分離條件為：流動相為70％的甲醇水溶液，流動相的流速為1.5ml/min，檢測波長為254nm。

進一步地，所述束絲放線菌菌株FIM06-0063的分離方法如下：