[發明專利]新的安絲菌素類化合物及其制備方法

有效

• 申請號: 201210148068.5
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN102731526A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 陳宏;鄭衛;賈緯;陳麗;陳曉明;王傳喜;黃維;楊煌建;謝穎;張祝蘭
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18;C12P17/18;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/01
• 代理公司: 福州市鼓樓區京華專利事務所(普通合伙) 35212
• 代理人: 宋連梅

1.式（I）代表的新的安絲菌素類化合物，

其中，R為CH₂CH₃或CH₂CH(CH₃)₂。

2.一種如權利要求1所述的新的安絲菌素類化合物的制備方法，其特征在于：其操作步驟如下：

步驟一：制備束絲放線菌菌株FIM06-0063（Actinosynnema?sp）發酵液；

步驟二：將步驟一所獲得的束絲放線菌菌株FIM06-0063發酵液進行大孔樹脂吸附柱層析，得到粗提物；

步驟三：將步驟二所獲得的粗提物進行正相硅膠柱層析，并采用氯仿-甲醇梯度洗脫粗提物，然后分段收集各洗脫液；

步驟四：將步驟三所獲得的各洗脫液分別進行薄層層析，并采用高效液相色譜對各洗脫液分別進行檢測分析，然后將薄層層析結果顯橙紅色、且高效液相色譜檢測結果具有相同峰的洗脫液合并，并減壓濃縮該合并后的洗脫液得到第一濃縮物；

步驟五：將步驟四所獲得的第一濃縮物進行中壓反相硅膠柱層析以獲得粗產物，進行中壓反相硅膠柱層析時，先采用體積分數為10%甲醇水溶液為流動相平衡10分鐘后，然后流動相采用體積比10%~100%：1的甲醇-水溶劑系統梯度洗脫90min，流動相的流速為5ml/min；

步驟六：將步驟五所獲得的粗產物進行Sephadex?LH-20凝膠柱層析，所述Sephadex?LH-20凝膠柱層析采用體積比1:1的氯仿-甲醇溶劑系統洗脫，并?根據流分與碘化鉍鉀顯色反應分段收集各流分，然后將與碘化鉍鉀反應顯色相同的流分合并，減壓濃縮以獲得第二濃縮物；

步驟七：將步驟六所獲得的第二濃縮物采用制備型高效液相色譜進行分離，得到3個組分；最后，將3個組分分別經過制備型硅膠板分離以獲得安絲菌素類化合物；所述制備型高效液相色譜的分離條件為：流動相為70%的甲醇水溶液，流動相的流速為1.5ml/min，檢測波長為254nm。

3.如權利要求2所述的新的安絲菌素類化合物的制備方法，其特征在于：所述束絲放線菌菌株FIM06-0063的分離方法如下：

步驟100：取云南美登木的老葉和葉柄，用自來水沖洗30min后，再用蒸餾水洗凈置于無菌培養皿中；接著將所述老葉和葉柄依次用75%酒精擦洗，無菌水沖洗后，轉入質量分數為0.1%的氯化汞溶液中浸泡3min，再用無菌水沖洗5次，除去消毒液；然后將所述老葉和葉柄剪成小片或小段，放入無菌的研缽中搗碎成糊狀物；

步驟200：用無菌的玻璃涂布棒沾取少量步驟100中得到的糊狀物直接涂布于淀粉天冬素瓊脂平板，然后將平板置于28℃下培養7～20天，得到放線菌單菌落；所述淀粉天冬素瓊脂的組分：可溶性淀粉2%，L-天冬素0.05%，KNO₃?0.1%，K₂HPO₄·3H₂O?0.05%，NaCl?0.05%，MgSO₄·7H₂O?0.05%，CaCO₃0.05%，瓊脂1.5%，蒸餾水配制，pH為7.5，且該淀粉天冬素瓊脂組分中的百分數均為質量分數；

步驟300：將經過步驟200處理獲得的放線菌單菌落轉接于無機鹽淀粉瓊脂斜面，獲得束絲放線菌菌株FIM06-0063的斜面培養物；所述無機鹽淀粉瓊脂斜面的組分為：可溶性淀粉10g；K₂HPO₄·3H₂O?1g；MgSO₄·7H₂O?1g；NaCl?1g；(NH₄)₂SO₄?2g；CaCO₃?2g；FeSO₄·7H₂O?0.001g；MnCl₂·4H₂O?0.001g；ZnSO₄·7H₂O?0.001g；瓊脂20g；蒸餾水1000mL，pH為7.0～7.4。