[發明專利]一種黃花倒水蓮的組織培養繁殖方法

無效

• 申請號: 201210147606.9
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN102640708A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 林文革;吳美華;張東海;陳細萍;曹冬萍;溫亞鋒
• 申請（專利權）人: 地緣（廈門）生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廈門市誠得知識產權代理事務所 35209
• 代理人: 方惠春

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體涉及一種黃花倒水蓮的組織培養繁殖方法。

背景技術

?黃花倒水蓮（Polygala?fallax?Hemsl.）屬遠志科(Polygalaceae)遠志屬(?Polygala)?植物，別名黃花參、雞仔樹、吊吊黃、黃花吊水蓮、觀音串、黃花大遠志等，分布于湖南、福建、廣西、江西、廣東和云南等地，生于山坡疏林下或溝谷叢林中。黃花倒水蓮屬珍貴中藥材，藥用其全草；具有補益、強壯、祛濕、散瘀功效，主治虛弱虛腫、急慢性肝炎、腰腿酸痛、跌打損傷；其提取物具活血、抗炎、抗血脂作用，同時在小鼠上實驗其具增強免疫及耐缺氧等作用。

黃花倒水蓮藥用價值早被民間所認知，加之近年來對其藥用的日益重視，市場需求量大，而目前栽培仍以種子繁殖為主，種子產量低，采收困難，野生資源亦有限，導致資源嚴重短缺。

目前國內外關于黃花倒水蓮研究主要集中于其藥用成分及藥用機理等方面，而組織培養方面，僅同屬植物遠志有相關報道；張杭穎等近年來有開展黃花倒水蓮扦插、組織培養等試驗研究，但未見具體報道，亦未見有規模化種植等相關報道。

發明內容

因此，針對上述問題，本發明提供一種黃花倒水蓮的組織培養繁殖方法，利用該方法能在短期內獲得大量的黃花倒水蓮組培苗，有效的解決黃花倒水蓮產量低、采收困難、野生資源有限導致資源嚴重短缺等問題，同時為其優質苗木的規模化生產乃至資源培育與利用奠定基礎。

一種黃花倒水蓮的組織培養繁殖方法，包括以下步驟：

（1）外植體采集及消毒：取黃花倒水蓮當年生帶腋芽幼嫩莖段作為外植體，用洗潔精浸泡處理10?min，用軟毛刷輕輕刷洗莖段表面，流水沖洗30?min，置于超凈工作臺上，剪成帶1-2個節間的莖段，用質量濃度為0.1%?的KMnO4浸泡處理5min，無菌水沖洗2遍，體積濃度為75%的乙醇浸泡處理20?s，再用質量濃度為0.1%的升汞浸泡處理10?min，無菌水沖洗6遍，獲得無菌材料；

（2）不定芽的誘導：將上述無菌材料接種于不定芽誘導培養基上，在溫度25±1?℃，光照時間11?h/d，光照強度3000?LX的條件下誘導黃花倒水蓮不定芽，誘導培養30天；?

（3）不定芽增殖培養：將誘導出的黃花倒水蓮不定芽轉接至不定芽增殖培養基中進行不定芽的增殖培養，培養條件為：溫度25±1?℃，光照時間11?h/d，光照強度3000?LX，增殖培養25天；

（4）不定芽生根培養：將增殖培養的不定芽轉入不定芽生根培養基中進行生根培養，培養條件為：溫度25±1?℃，光照時間11?h/d，光照強度3000?LX，生根培養25天即可獲得組培苗；

（5）煉苗及移栽：待組培苗80%長出根原基時將其移至大棚進行煉苗，7?天后將瓶苗輕輕夾出，洗凈根部培養基，用質量濃度為0.1%的代森猛鋅浸泡處理2～3?min，陰干，待植株枝干上的水分陰干好后，移栽入事先已用質量濃度為0.1%的高錳酸鉀消毒的移栽基質中，保持環境溫度25±1?℃，噴霧保濕，使空氣濕度保持在85-95%，覆蓋遮陰率70%的遮陽網，每7?天噴灑一次廣譜殺菌劑，30?天后長出新根時澆一次兩倍MS大量元素溶液。

進一步的改進是：所述步驟（2）中的不定芽誘導培養基為：1/2MS+BA1.0-3.0?mg/L+NAA0.1-0.3?mg/L，其中，不定芽誘導培養基中添加白砂糖30?g/L，卡拉膠6.5?g/L，調節不定芽誘導培養基的pH使pH=5.8-6.0。

進一步的改進是：所述步驟（3）中的不定芽增殖培養基為：WPM+BA1.0-3.0mg/L+NAA?0.1-0.3?mg/L?L，不定芽增殖培養基中添加白砂糖30?g/L，卡拉膠6.5?g/L，調節不定芽增殖培養基的pH使pH=5.8-6.0。

進一步的改進是：所述步驟（4）中的不定芽生根培養基為：1/2WPM+IBA?0.1-0.3?mg/L+ABT?0.2-0.4?mg/L，不定芽生根培養基中添加白砂糖15?g/L，卡拉膠6.5?g/L，調節pH值5.8-6.0。

進一步的改進是：所述步驟（5）中的移栽基質及其重量比為：泥炭土：黃泥土：珍珠巖=2：1：1。