[發(fā)明專利]一種用于測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210147411.4
• 申請日: 2012-05-11
• 公開（公告）號: CN102662059A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 北京美康生物技術(shù)研究中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種用于測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于包括：稀釋液、幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑及空白液；

所述的幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的兩種不同粒徑的膠乳顆粒的混合物，所述的膠乳顆粒為聚苯乙烯微球。

2.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的稀釋液為含有反應(yīng)增強劑的緩沖液，所述的緩沖液為Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HE?PES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的任一種，優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液；所述的反應(yīng)增強劑為PEG-300、PEG2000或PEG6000中的任一種或幾種，優(yōu)選為PEG6000；更優(yōu)選的所述的稀釋液中還含有2mol/L的氯化鈉。

3.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的粒徑為60－90nm和粒徑為160－200nm的膠乳顆粒的混合物。

4.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的膠乳試劑按照以下方法制備得到：

（1）膠乳前處理

取1ml未標記的膠乳顆粒加入10ml?0.02M?pH7.4磷酸緩沖液中，離心機10000rpm離心20min，去掉上清液、再用10ml?0.02M?pH7.4磷酸緩沖液重懸顆粒，離心機10000rpm離心20min，去掉上清并用5ml?0.02M?pH7.4磷酸緩沖液重懸、4℃保存待用；

（2）膠乳顆粒標記

將步驟（1）處理后膠乳用0.02M?pH6.1MES緩沖液將膠乳顆粒稀釋成10mg/ml濃度，然后加入1mg?EDC，混勻活化15分鐘，離心8000rpm棄去上清，并用0.02MPH7.4磷酸緩沖液重懸，加入1mg幽門螺桿菌抗原于10mg/ml?2ml膠乳液體中，室溫混勻2－4小時，離心機8000rpm離心15分鐘，將上清分離到另外的容器中備用，顆粒使用封閉液重懸，并室溫混勻1小時，離心機8000rpm離心15min，沉淀復(fù)溶于分散液，將標記完成的膠乳顆粒分裝成1ml/支，4℃保存；

（3）使用上述步驟分別對粒徑60－90nm和160－200nm的膠乳進行分別標記，標記結(jié)束后將所述60－90nm膠乳和所述160－200nm膠乳進行混合，按質(zhì)量體積百分比計，使60－90nm膠乳的濃度為0.673-0.732％，使160－200nm膠乳的濃度為0.135-0.323％，混合后進行保存，優(yōu)選的使用上述流程分別對粒徑70－90nm和160－180nm的膠乳進行分別標記，標記結(jié)束后將所述70－90nm膠乳和所述160－180nm膠乳進行混合，按質(zhì)量體積百分比計，使70－90nm膠乳濃度為0.708-0.732％，使160－180nm膠乳濃度為0.135-0.235％，混合后進行保存；

所述的封閉液為含有5g/L?BSA的0.02M?PH7.4的磷酸緩沖液；

所述的分散液由BSA，吐溫-20、PVP-K30以及生物防腐劑通過0.02M?PH7.4的磷酸緩沖液配制而成，其中BSA濃度為1g/L，吐溫-20濃度為0.05%（v/v），PVP-K30濃度為2g/L，生物防腐劑濃度為0.05%（v/v）。

5.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述抗原包括幽門螺桿菌全菌體蛋白抗原、幽門螺桿菌尿素酶抗原、幽門螺桿菌細胞毒素相關(guān)蛋白A抗原或幽門螺桿菌細胞空泡毒素A抗原中的一種或多種。

6.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：還含有標準稀釋液、校準品和質(zhì)控品。

7.按照權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述的標準稀釋液為Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HE?PES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的任一種，優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液。

8.按照權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述的校準品、質(zhì)控品是一種幽門螺桿菌抗體溶液，其中包括PBS緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑以及幽門螺桿菌特異性抗體；

所述穩(wěn)定劑選自蛋白質(zhì)、氨基酸、無機鹽、表面活性劑中的一種或多種

所述防腐劑選自0.1%的疊氮鈉、Proclin-300、慶大霉素中的一種或多種。

9.權(quán)利要求1-9任一項所述的試劑盒在制備測定幽門螺桿菌抗體試劑中的應(yīng)用。

10.一種用于診斷胃病或胃癌的三聯(lián)檢試劑盒，其特征在于包括權(quán)利要求1-8任一項所述的試劑盒，還包括胃蛋白酶原I檢測試劑盒及胃蛋白酶原II檢測試劑盒。