[發(fā)明專利]一株大豆抗原蛋白降解菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210147184.5
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN102660480A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇玉虹;田玉民;郭福來;許云賀;張莉力;王安民;韓麗娟
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽華年飼料有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23L1/20;C12R1/125
• 代理公司: 錦州恒大專利事務(wù)所 21222
• 代理人: 王子平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)微生物領(lǐng)域，涉及一株大豆抗原蛋白降解芽孢桿菌菌株及其在發(fā)酵豆粕生產(chǎn)中的應(yīng)用。

技術(shù)背景

豆粕是一種優(yōu)質(zhì)的植物蛋白飼料，具有蛋白含量高，氨基酸組成合理，動物對其利用率高的特點。近年來又發(fā)現(xiàn)大豆中含有豐富的提高動物免疫力的大豆異黃酮等物質(zhì)，更是受到人們的歡迎。但是豆粕中存在的大豆抗原蛋白是一種熱穩(wěn)定性抗?fàn)I養(yǎng)因子，嚴(yán)重影響到仔豬等幼齡動物的機體健康和生長速度，表現(xiàn)為小腸結(jié)構(gòu)受損，食糜滯留時間縮短，營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運、吸收紊亂，導(dǎo)致消化不良、腹瀉和生長受阻。現(xiàn)已確定仔豬對大豆抗原蛋白的過敏反應(yīng)是引起仔豬腹瀉的主要原因之一。如何降低和去除豆粕中的大豆抗原蛋白，進而提高豆粕的營養(yǎng)價值和安全性成為飼料工作者研究的熱點。

大豆抗原蛋白的熱穩(wěn)定性強，是大豆中對動物(特別是幼齡動物)影響最大的一類抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)。在去除豆粕中大豆抗原蛋白的方法中，利用生物酶處理豆粕效果較好，但是成本較高，而微生物發(fā)酵法作為一種無害的、高效的、低成本的處理方法成為目前處理豆粕的一種趨勢。但是從目前市場來看，質(zhì)量良莠不齊，同一產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定，是發(fā)酵豆粕產(chǎn)品的主要問題。這主要是由于發(fā)酵用的菌種性能不穩(wěn)定，產(chǎn)酶能力不高，針對性差等原因所導(dǎo)致。因此獲得能夠降解豆粕中大豆抗原蛋白、高產(chǎn)蛋白酶和性能穩(wěn)定的菌株是生產(chǎn)質(zhì)量穩(wěn)定的發(fā)酵豆粕，提高豆粕的營養(yǎng)價值和安全性的基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是針對豆粕中存在的大豆抗原蛋白會引起仔豬腹瀉和生長受阻這一問題，提供一株能夠降解豆粕中大豆抗原蛋白的高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌菌株。本發(fā)明生產(chǎn)的菌株能夠降解豆粕中的大豆抗原蛋白，降低其對仔豬的抗?fàn)I養(yǎng)作用，提高豆粕在仔豬飼料中的應(yīng)用價值。

本發(fā)明的另一個目的在于提供該枯草芽孢桿菌菌株在發(fā)酵豆粕中的應(yīng)用。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一株大豆抗原蛋白降解菌株，該菌株命名為枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）HN013，已于2012年2月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.?5788。

所述的枯草芽孢桿菌菌株的個體形態(tài)特征為：細胞大小通常為（0.7μm～0.8μm）×（2.0μm～3.0μm），桿狀，很少成連，無莢膜，芽孢呈橢圓形或柱形，中生或偏生。菌落形態(tài)為：規(guī)則圓形，白色，表面濕潤，中間隆起，邊緣光滑。

所述的枯草芽孢桿菌菌株的主要生理生化特性為：革蘭氏反應(yīng)陽性，接觸酶陽性，能發(fā)生乙酰甲基甲醇反應(yīng)；能利用葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和甘露糖產(chǎn)酸，能水解淀粉，分解色氨酸形成吲哚；培養(yǎng)溫度20℃~40℃，最適生長溫度23℃~25℃，pH6~8，最佳pH7.2。產(chǎn)蛋白酶能力較高，達到539.5?U/mL。

該菌株的16?S?rDNA?序列全長共?1463?bp,經(jīng)Genbank比對相似性達到99.8%；確定為枯草芽孢桿菌。

有益效果：

本試驗通過初篩、復(fù)篩，最終得到一株能夠降解豆粕中大豆抗原蛋白的高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌菌株（Bacillus?subtilis）HN013，對其生物學(xué)特性和產(chǎn)蛋白酶能力進行了研究，并在發(fā)酵豆粕中的得到了成功應(yīng)用。該菌株能夠降解豆粕中的大豆抗原蛋白，降低其對仔豬的抗?fàn)I養(yǎng)作用，提高豆粕在仔豬飼料中的應(yīng)用價值。

具體實施方式

實施例1枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）HN013菌株的獲得

1、培養(yǎng)基

富集培養(yǎng)基：牛肉膏3g，蛋白胨10?g，NaCl?5?g，蒸餾水1000mL，調(diào)節(jié)pH至7.2；初篩培養(yǎng)基：牛肉膏3?g，酪素10?g，NaCl?5?g，瓊脂20?g，蒸餾水1000mL，調(diào)節(jié)pH至7.2；種子培養(yǎng)基：葡萄糖10?g，蛋白胨5?g，酵母膏5?g，KH₂PO₄?1?g，MgSO_4?0.2?g，Na₂CO₃?10?g，蒸餾水1000mL，調(diào)節(jié)pH至7.2；發(fā)酵培養(yǎng)基：豆粕40?g，蒸餾水1000mL，調(diào)節(jié)pH至7.2；固體斜面培養(yǎng)基：葡萄糖10?g，蛋白胨5?g，酵母膏5?g，KH₂PO₄?1?g，MgSO_4?0.2?g，Na₂CO₃?10?g，瓊脂20?g，蒸餾水1000mL，調(diào)節(jié)pH至7.2；